| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-32页 |
| ·PRRSV分类 | 第13-14页 |
| ·理化特性 | 第14页 |
| ·抗原性 | 第14页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第14-25页 |
| ·PRRSV基因组的结构与功能 | 第14-16页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第16-21页 |
| ·聚合酶 | 第17页 |
| ·主要结构蛋白 | 第17-20页 |
| ·次要结构蛋白 | 第20-21页 |
| ·PRRSV的基因组变异和RNA重组 | 第21-22页 |
| ·PRRSV的抗原性变异 | 第22-23页 |
| ·PRRSV的毒力变异 | 第23页 |
| ·PRRSV的单克隆抗体 | 第23-25页 |
| ·抗GP3、GP4和GP5的McAb | 第23-24页 |
| ·抗M蛋白McAb | 第24页 |
| ·抗N蛋白McAb | 第24-25页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第25-29页 |
| ·抗PRRSV的体液免疫反应 | 第25-27页 |
| ·PRRSV的细胞免疫反应 | 第27-28页 |
| ·PRRSV与免疫抑制 | 第28-29页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第29-32页 |
| ·PRRS传统常规疫苗 | 第29-30页 |
| ·PRRS灭活疫苗 | 第29页 |
| ·PRRS弱毒疫苗 | 第29-30页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第30-32页 |
| ·亚单位疫苗 | 第30页 |
| ·病毒载体疫苗 | 第30-31页 |
| ·DNA疫苗 | 第31-32页 |
| 第2章 GP5蛋白免疫增强突变体的研究及其单克隆抗体的制备 | 第32-78页 |
| ·研究的目的与意义 | 第32-33页 |
| ·实验材料与方法 | 第33-40页 |
| ·细胞、菌株、动物 | 第33页 |
| ·质粒、载体 | 第33-35页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第35-36页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第36页 |
| ·免疫反应试验所用抗原及血清 | 第36页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| ·缓冲液与相关试剂及其配制 | 第37-40页 |
| ·质粒提取用缓冲液及鉴定试剂 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞制备用试剂 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液及试剂 | 第38-39页 |
| ·Western blot缓冲液及试剂 | 第39页 |
| ·ELISA缓冲液及试剂 | 第39-40页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第40页 |
| ·试验方法 | 第40-55页 |
| ·目的外源基因的PCR扩增 | 第40页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第40页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第40-41页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第41页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第41页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第42-43页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第43-44页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第44页 |
| ·质粒重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第44页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第44-45页 |
| ·诱导表达 | 第45页 |
| ·用于SDS-PAGE电泳的包涵体提取 | 第45页 |
| ·用于ELISA抗原的包涵体提取 | 第45页 |
| ·GP5-ELISA方法的建立 | 第45-46页 |
| ·GP5-ELISA最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方阵滴定) | 第45-46页 |
| ·GP5-ELISA阴阳性界限的确定 | 第46页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的体外表达 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA试验 | 第47-48页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第48-52页 |
| ·单克隆抗体制备的技术路线 | 第48-49页 |
| ·抗原的制备 | 第49页 |
| ·动物免疫 | 第49页 |
| ·SP2／O骨髓瘤细胞的活化 | 第49页 |
| ·SP2／O骨髓瘤细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第50页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第50页 |
| ·细胞融合 | 第50-51页 |
| ·间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第51-52页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第52页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第52页 |
| ·单克隆抗体的结合活性及特异性鉴定 | 第52页 |
| ·单克隆抗体中和活性鉴定 | 第52页 |
| ·单克隆抗体识别表位分析 | 第52页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID50)的测定 | 第52-53页 |
| ·动物试验 | 第53页 |
| ·免疫小鼠待检血清的制备与处理 | 第53页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第53-54页 |
| ·统计学方法 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-72页 |
| ·ORF5基因突变体的构建一 | 第55页 |
| ·原核表达质粒的构建与鉴定 | 第55-58页 |
| ·重组原核融合蛋白在大肠杆菌中的融合表达 | 第58-59页 |
| ·Western blot检测目的融合蛋白的体外表达 | 第59页 |
| ·GP5-ELISA最佳条件的确定 | 第59页 |
| ·GP5-ELISA阴阳界限的确定 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第60-63页 |
| ·抗原的制备 | 第60页 |
| ·细胞融合 | 第60页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第60页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体中和活性鉴定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体识别表位鉴定 | 第62-63页 |
| ·ORF5基因突变体的构建二 | 第63-64页 |
| ·真核表达质粒的构建与鉴定 | 第64-68页 |
| ·Western blot鉴定目的基因体外表达活性 | 第68-69页 |
| ·动物试验 | 第69页 |
| ·ELISA抗体检测 | 第69-70页 |
| ·细胞免疫反应检测 | 第70-71页 |
| ·中和抗体水平检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-77页 |
| ·ORF5基因突变体的构建 | 第72-73页 |
| ·ELASA检测方法的建立 | 第73页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第73-75页 |
| ·修饰的免疫增强突变体的免疫 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87页 |
