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花生(Arachis Hypogaea L.)体细胞胚胎发生途径植株再生及基因转化体系的优化

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-12页
1 引言第12-26页
   ·花生转基因研究的意义第12-13页
   ·花生再生技术体系第13-18页
     ·器官发生途径的植株再生第13-16页
     ·体细胞胚胎发生途径的植株再生第16-18页
   ·花生遗传转化的研究进展第18-23页
     ·农杆菌介导的遗传转化法第18-21页
     ·基因枪介导法第21-22页
     ·电击穿孔法基因转化第22-23页
     ·微注射法和花粉管通道法的基因转化第23页
   ·花生组织培养与转基因研究存在的主要问题第23-24页
     ·花生组织培养再生体系需进一步优化第23-24页
     ·花生遗传转化体系有待完善第24页
   ·本研究的主要内容和目标第24-26页
2 材料与方法第26-34页
   ·试验材料第26-27页
     ·植物材料第26页
     ·菌株与质粒第26-27页
   ·试验方法第27-34页
     ·花生体细胞胚胎发生途径植株再生体系的研究试验第27-29页
       ·培养基的制备第27页
       ·外植体的准备第27页
       ·2 ,4 - D 浓度和基因型对胚小叶植株再生的影响第27-28页
       ·2 ,4 - D 诱导时间对胚小叶植株再生的影响第28页
       ·高浓度2,4-D 培养基继代对胚性愈伤组织分化的影响第28页
       ·不同分化培养基对胚性愈伤再分化的影响第28-29页
       ·毒锈定( P i c ) 对胚小叶植株再生的影响第29页
     ·农杆菌介导花生基因转化体系的研究试验第29-34页
       ·花生胚性愈伤组织的培养第29页
       ·农杆菌培养与胚性愈伤组织的侵染第29页
       ·筛选转npt II 基因的胚性愈伤组织所用 Kan 适宜浓度的研究第29-30页
       ·预培养时间对转化率的影响第30页
       ·菌液浓度对转化率的影响第30页
       ·侵染时间对转化率的影响第30页
       ·转基因花生的分子生物学鉴定第30-34页
         ·含目的基因质粒 DNA 的制备第30-31页
         ·花生基因组 DNA 的提取第31页
         ·转基因植株的 PCR 扩增第31-33页
         ·琼脂糖凝胶电泳法检测 P C R 产物第33-34页
3 结果与分析第34-46页
   ·花生胚小叶体细胞胚胎发生途径植株再生体系的建立第34-41页
     ·2 ,4 - D 浓度和基因型对胚小叶植株再生的影响第34-37页
       ·对胚小叶胚性愈伤诱导率的影响第34页
       ·对胚小叶胚性愈伤褐化率的影响第34-35页
       ·对胚小叶植株再生的影响第35-37页
     ·2 ,4 - D 诱导时对胚小叶植株再生的影响第37-38页
     ·高浓度2 ,4 - D 培养基继代对胚性愈伤组织分化的影响第38-39页
     ·不同分化培养基对胚性愈伤组织分化和植株再生的影响第39-40页
     ·毒锈定( P i c ) 对胚小叶植株再生的影响第40-41页
     ·优化的花生胚小叶植株再生技术体系第41页
   ·农杆菌介导花生基因转化技术体系的优化第41-46页
     ·筛选转npt II 基因的胚性愈伤组织所用 Kan 适宜浓度第41页
     ·预培养时间对转化率的影响第41-42页
     ·菌液浓度对转化率的影响第42-43页
     ·侵染时间对转化率的影响第43页
     ·优化的花生基因转化体系第43-44页
     ·转基因植株的 P C R 分析第44-46页
4 讨论第46-49页
   ·影响花生胚小叶植株再生的主要因素分析第46页
   ·本研究建立的再生体系的评价第46-47页
   ·影响花生胚性愈伤组织基因转化效率的主要因素分析第47-48页
   ·本研究的创新点第48-49页
5 结论第49-51页
   ·花生胚胎发生途径植株再生的适宜条件第49页
   ·农杆菌侵染花生胚性愈伤进行基因转化的适宜条件第49-50页
   ·转 R s - a f p l 基因花生植株的获得第50页
   ·农杆菌侵染花生胚性愈伤组织进行基因转化的技术规程第50-51页
参考文献第51-59页
附录第59-63页
致谢第63-64页
攻读学位期间发表论文情况表第64-65页
图版第65页

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