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番茄中乙烯信号转录因子LeERF1和LeERF2调控机制研究

插图、附表清单第1-15页
缩略语表第15-16页
第一章 文献综述第16-27页
   ·乙烯的生物合成第16-18页
     ·ACC合酶(ACS)第16-17页
     ·ACC氧化酶(ACO)第17-18页
   ·乙烯信号转导第18-22页
     ·乙烯受体第19页
     ·CTR和蛋白激酶第19-20页
     ·EIN2第20页
     ·EIN3 and EIL第20-21页
     ·乙烯反应元件结合蛋白(EREBPs)第21-22页
   ·信号转录因子第22-24页
     ·转录因子的结构和功能第22-23页
     ·番茄中乙烯信号EREBPs转录因子第23-24页
   ·研究目的与内容第24-27页
     ·研究目的、意义第24-25页
     ·研究内容第25-27页
第二章 LeERF1和LeERF2基因克隆和序列分析第27-41页
   ·材料与试剂第27-29页
     ·材料第27页
     ·酶及试剂第27页
     ·试剂的配制第27-28页
     ·主要仪器设备第28-29页
   ·方法第29-33页
     ·破色期番茄果实总RNA提取第29页
     ·RT-PCR扩增LeERF1和LeERF2基因第29-30页
     ·LeERF1和LeERF2基因的克隆第30-33页
     ·DNA序列测定及分析第33页
   ·结果与分析第33-38页
     ·重组质粒pET-LeERF1的构建过程第33-34页
     ·破色期番茄果实总RNA提取第34页
     ·LeERF1基因的RT-PCR扩增第34页
     ·重组pET-LeERF1质粒的构建和鉴定第34-35页
     ·LeERF1基因序列结果和分析第35-37页
     ·重组pET-LeERF2质粒的构建过程第37页
     ·LeERF2基因的RT-PCR扩增第37页
     ·重组pET-LeERF2质粒的构建和鉴定第37页
     ·LeERF2基因序列结果和分析第37-38页
   ·讨论第38-41页
第三章 LeERF1和LeERF2基因在原核细胞中的表达和亲和层析纯化第41-52页
   ·材料与试剂第41-43页
     ·菌株与质粒第41页
     ·试剂第41页
     ·溶液配制第41-43页
   ·实验方法第43-46页
     ·LeERF1和LeERF2基因在大肠杆菌BL21中的表达第43页
     ·蛋白表达条件优化第43页
     ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第43-44页
     ·蛋白质纯化方案第44页
     ·EMSA第44-46页
   ·结果与分析第46-50页
     ·LeERF1和LeERF2蛋白表达条件优化第46-47页
     ·亲和层析纯化和回收LeERF1和LeERF2蛋白第47-49页
     ·EMSA第49-50页
   ·讨论第50-52页
第四章 番茄乙烯信号转录因子LeERF1/2多克隆抗体制备第52-59页
   ·材料与试剂第52-53页
     ·材料第52页
     ·试剂第52页
     ·主要溶液第52-53页
   ·方法第53-55页
     ·多克隆抗体制备方案第53页
     ·间接ELISA法检测血清效价第53-54页
     ·多克隆抗体的纯化第54页
     ·Western blotting检测多克隆抗体第54-55页
   ·结果与分析第55-58页
     ·LeERF1抗体的制备第55-56页
     ·LeERF2抗体的制备第56-57页
     ·Western blotting检测多克隆抗体第57-58页
   ·讨论第58-59页
第五章 番茄果实成熟过程中LeERF1的亚细胞定位第59-68页
   ·材料与试剂第59-60页
     ·材料第59页
     ·试剂第59页
     ·主要溶液第59-60页
   ·方法第60-62页
     ·样品包埋第60-61页
     ·胶体金免疫染色第61页
     ·番茄果实蛋白质的提取第61页
     ·Western blotting第61-62页
   ·结果与分析第62-66页
     ·绿熟期番茄果实中LeERF1的亚细胞定位第62页
     ·破色期番茄果实中LeERF1的亚细胞定位第62-65页
     ·试验对照第65页
     ·Western blotting第65-66页
   ·讨论第66-68页
第六章 LeERF1特异性结合启动子的分离和功能鉴定第68-84页
   ·材料与试剂第68-70页
     ·试验材料第68页
     ·酶及试剂第68页
     ·试剂配制第68-70页
   ·方法第70-74页
     ·提取番茄总DNA第70页
     ·随机引物设计第70-71页
     ·随机引物PCR扩增第71页
     ·体外结合反应第71页
     ·乙烯信号转录因子LeERF1结合基因的克隆第71-73页
     ·银染凝胶阻滞试验第73-74页
   ·结果与分析第74-82页
     ·番茄基因组DNA提取第74页
     ·随机引物扩增番茄基因组DNA第74-81页
     ·银染凝胶阻滞试验检测LeERF1蛋白与启动子TLBF1/2的结合反应第81-82页
   ·讨论第82-84页
第七章 乙烯信号转录因子LeERF1与番茄果实病程胁迫的关系第84-109页
   ·材料与试剂第84-86页
     ·试验材料第84页
     ·酶及试剂第84页
     ·试剂的配制第84-86页
   ·方法第86-92页
     ·番茄果实蛋白质的提取第86-87页
     ·番茄果实总RNA提取第87页
     ·RT-PCR扩增基因第87-88页
     ·扩增基因鉴定第88-89页
     ·番茄果实乙烯释放量和几丁质酶酶活的检测第89-91页
     ·Western blotting第91-92页
   ·结果与分析第92-107页
     ·番茄青霉菌侵染绿熟期番茄果实第92-96页
     ·番茄青霉菌侵染破色期番茄果实第96-99页
     ·番茄青霉菌侵染粉红期番茄果实第99-102页
     ·番茄青霉菌侵染红熟期番茄果实第102-106页
     ·番茄果实中CHIT-1基因片段的克隆和测序第106页
     ·番茄果实中基因片段ubil23的克隆和测序第106-107页
   ·讨论第107-109页
第八章 结论第109-110页
参考文献第110-117页
附录第117-132页
致谢第132-133页
个人简历第133页

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