| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-22页 |
| 1．1 日本乙脑病毒的发现 | 第8页 |
| 1．2 日本乙型脑炎的危害及流行 | 第8-9页 |
| 1．3 JEV的分类及分型 | 第9-10页 |
| 1．4 日本乙脑的诊断与防治 | 第10-12页 |
| 1．5 日本乙脑病毒的分子生物学 | 第12-17页 |
| 1．5．1 日本乙脑病毒的分子结构 | 第12-13页 |
| 1．5．2 日本乙脑病毒的侵染与复制 | 第13-15页 |
| 1．5．3 日本乙脑病毒的结构蛋白 | 第15-16页 |
| 1．5．4 日本乙脑病毒的非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1．6 日本乙脑病毒的毒株和减毒株 | 第17-18页 |
| 1．7 日本乙脑病毒的疫苗 | 第18-19页 |
| 1．7．1 JEV灭活疫苗 | 第18页 |
| 1．7．2 JEV减毒活疫苗 | 第18页 |
| 1．7．3 JEV亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| 1．7．4 JEV重组活病毒疫苗 | 第19页 |
| 1．8 日本乙脑病毒的DNA疫苗 | 第19-22页 |
| 1．8．1 DNA疫苗作用机理 | 第19-21页 |
| 1．8．2 日本乙脑病毒的DNA疫苗 | 第21-22页 |
| 2 本研究的内容、目的和意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-30页 |
| 3．1 毒株、菌株与质粒 | 第23页 |
| 3．2 培养基 | 第23页 |
| 3．3 酶及其它试剂 | 第23页 |
| 3．4 主要溶液及配制 | 第23-24页 |
| 3．4．1 碱裂解法制备质粒DNA用试剂 | 第23-24页 |
| 3．4．2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳用试剂 | 第24页 |
| 3．5 大肠杆菌感受态的制备 | 第24页 |
| 3．6 质粒的小量制备 | 第24-25页 |
| 3．7 病毒活化 | 第25页 |
| 3．8 JEV RNA模板的制备 | 第25页 |
| 3．9 引物设计和合成 | 第25-26页 |
| 3．10 RT-PCR扩增 | 第26-27页 |
| 3．11 PCR产物的快速回收(V-gene Biotechnology limited DNA Gel extraetion Kit) | 第27页 |
| 3．12 PCR产物与载体的连接 | 第27-28页 |
| 3．13 克隆载体的转化 | 第28页 |
| 3．14 重组质粒的筛选与鉴定 | 第28页 |
| 3．15 测序及序列分析 | 第28页 |
| 3．16 原核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3．17 细菌的诱导表达 | 第29页 |
| 3．18 JEV DNA疫苗的构建 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-43页 |
| 4．1 JEV/HW株病毒的活化与扩增 | 第30页 |
| 4．1．1 用乳鼠脑组织活化与扩增病毒 | 第30页 |
| 4．1．2 用细胞系活化与扩增病毒 | 第30页 |
| 4．2 JEV/HW株病毒各基因片段的扩增 | 第30-34页 |
| 4．2．1 JEV/HW株病毒各基因片段扩增策略 | 第30-31页 |
| 4．2．2 JEV/HW株病毒各基因片段扩增结果 | 第31-34页 |
| 4．3 全长的JEV/HW株病毒基因组分析 | 第34-37页 |
| 4．3．1 全长的JEV/HW株病毒与P3株及其它18株JEV病毒核昔酸变异的比较 | 第34-36页 |
| 4．3．2 全长的JEV/HW株病毒与P3株编码氨基酸变异的比较 | 第36页 |
| 4．3．3 19株全长的JEV株病毒分基因组子进化树的分析 | 第36-37页 |
| 4．4 原核表达载体的构建与表达 | 第37-41页 |
| 4．4．1 原核表达载体的构建策略 | 第37-39页 |
| 4．4．2 原核表达载体重组子的鉴定 | 第39-40页 |
| 4．4．3 原核表达 | 第40-41页 |
| 4．5 JEV/HW株DNA疫苗的构建 | 第41-43页 |
| 5 讨论 | 第43-46页 |
| 5．1 JEV/HW株分子背景对预防JEV的意义 | 第43页 |
| 5．2 JEV/HW株保守序列分析 | 第43-44页 |
| 5．3 JEV/HW株与JEV/P3株亲缘关系分析 | 第44页 |
| 5．4 JEV遗传进化的探讨 | 第44页 |
| 5．5 JEV/HW病毒培养方法的探讨 | 第44-46页 |
| 6 结论及创新点 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-77页 |
