| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 文中缩写 | 第8-9页 |
| 部分试剂的配置 | 第9-12页 |
| 综述 | 第12-25页 |
| 1．D-氨基酸氧化酶及其在自然界的分布 | 第12-13页 |
| 2．D-氨基酸氧化酶的催化机制 | 第13-14页 |
| 3．变异三角酵母的D-氨基酸氧化酶 | 第14-16页 |
| 3．1 生长和产酶 | 第14-15页 |
| 3．2 分离和纯化 | 第15页 |
| 3．3 酶学特性 | 第15-16页 |
| 3．4 稳定性和活性 | 第16页 |
| 4．D-氨基酸氧化酶的基因克隆和序列分析 | 第16-19页 |
| 5．D-氨基酸氧化酶基因的表达 | 第19-20页 |
| 6．D-氨基酸氧化酶的应用 | 第20-23页 |
| 6．1 1DAO酶促转化CPC为GL-7-ACA | 第20-21页 |
| 6．2 DAO生物催化剂类型 | 第21-23页 |
| 7．酶促转化CPC成为7-ACA研究进展 | 第23-25页 |
| 第一章 三角酵母D-氨基酸氧化酶在大肠杆菌中的表达、纯化和固定化的研究 | 第25-40页 |
| 前言 | 第25-26页 |
| 1．材料与方法 | 第26-34页 |
| 1．1 材料 | 第26页 |
| 1．1．1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 1．1．2 试剂 | 第26页 |
| 1．2 方法 | 第26-34页 |
| 1．2．1 提取含目的片段的质粒DNA | 第26-27页 |
| 1．2．2 普通琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 1．2．3 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 1．2．4 DAO酶活力测定 | 第28页 |
| 1．2．5 以丙酮酸钠制备DAO测活标准曲线(25℃) | 第28-29页 |
| 1．2．6 蛋白浓度测定 | 第29-31页 |
| 1．2．7 pLHB3表达质粒的构建(由实验室刘洪波构建) | 第31页 |
| 1．2．8 pLHB-3在大肠杆菌中的发酵表达 | 第31-32页 |
| 1．2．9 DAAO的纯化和固定化酶的工艺研究 | 第32-34页 |
| 2．结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2．1 pLHB3在大肠杆菌中的发酵表达 | 第34-35页 |
| 2．1．1 发酵过程中菌生长曲线 | 第34页 |
| 2．1．2 发酵过程中产酶曲线 | 第34-35页 |
| 2．1．3 乳糖的补加方式对产酶的影响 | 第35页 |
| 2．2 DAAO纯化结果 | 第35-37页 |
| 2．3 固定化DAAO的性质 | 第37-39页 |
| 2．3．1 固定化酶在4oC储存稳定性 | 第37页 |
| 2．3．2 固定化酶对CPC的转化 | 第37-39页 |
| 3．结论 | 第39-40页 |
| 第二章 三角酵母D-氨基酸氧化酶基因与血红蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达的研究 | 第40-46页 |
| 前言 | 第40-41页 |
| 1．材料与方法 | 第41-44页 |
| 1．1 材料 | 第41页 |
| 1．1．1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 1．1．2 试剂和酶 | 第41页 |
| 1．2 方法 | 第41-44页 |
| 1．2．1 pLX01质粒的构建 | 第41-42页 |
| 1．2．2 PCR扩增VHb基因 | 第42页 |
| 1．2．3 载体pLHB3和目的DNA片段的限制性酶切 | 第42-43页 |
| 1．2．4 载体pLHB3的DNA片段与外源基因的连接和转化 | 第43页 |
| 1．2．5 重组质粒pLHB-VHb(pLX01)的鉴定 | 第43页 |
| 1．2．6 质粒pLX01在E.coli中的表达 | 第43-44页 |
| 2．结果与讨论 | 第44-45页 |
| 2．1 PCR扩增VHb基因 | 第44页 |
| 2．2 重组质粒pLHB-VHb(pLX01)的鉴定 | 第44-45页 |
| 2．3 质粒pLX01在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第45页 |
| 3．结论 | 第45-46页 |
| 第三章 粘红酵母D-氨基酸氧化酶基因的克隆与表达 | 第46-53页 |
| 前言 | 第46-47页 |
| 1．材料与方怯 | 第47-50页 |
| 1．1 材料 | 第47页 |
| 1．1．1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 1．1．2 试剂和工具酶 | 第47页 |
| 1．2 方法 | 第47-50页 |
| 1．2．1 细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 1．2．2 pRSET质粒图谱及RT-PCR引物设计以及pRSET-RgDAAO的构建 | 第48页 |
| 1．2．3 RT-PCR扩增DAAO基因 | 第48-49页 |
| 1．2．4 载体pRSET目的DNA片段和外源基因的连接和转化 | 第49页 |
| 1．2．5 重组大肠杆菌菌株LX02的诱导表达 | 第49-50页 |
| 2．结果与讨论 | 第50-52页 |
| 2．1 细胞总RNA的提取及RT-PCR扩增DAAO基因 | 第50页 |
| 2．2 pMD18T-DAAO连接产物的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 2．3 重组质粒pRSET-DAAO的鉴定 | 第51页 |
| 2．4 DAAO的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3．结论 | 第52-53页 |
| 英文摘要 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 学位论文独创性声明 | 第61页 |
| 学位论文版权的使用授权书 | 第61页 |
