| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·SP蛋白的研究概况 | 第11-14页 |
| ·SP蛋白的积累及其与症状的关系 | 第11-12页 |
| ·SP蛋白的血清学特性 | 第12-13页 |
| ·SP基因的复制、转录与表达 | 第13-14页 |
| ·SP同源性分析 | 第14页 |
| ·农杆菌介导的水稻转基因技术研究 | 第14-19页 |
| ·存在问题及本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·供试材料 | 第21-23页 |
| ·供试毒源及介体 | 第21页 |
| ·供试水稻品种 | 第21页 |
| ·供试菌株 | 第21页 |
| ·质粒及载体 | 第21页 |
| ·试剂及酶类 | 第21页 |
| ·实验主要仪器 | 第21-22页 |
| ·抗血清 | 第22页 |
| ·供试培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·组织培养培养基 | 第22页 |
| ·细菌培养培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·SP基因克隆 | 第23-26页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·病叶总RNA的提取 | 第23页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第24页 |
| ·质粒连接 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第25页 |
| ·质粒的提取 | 第25页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·SP基因的序列测定 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·pEmu-SP植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·pK-SP植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·pCB-SP植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·转化农杆菌 | 第26-27页 |
| ·三亲交配法 | 第26-27页 |
| ·直接转化法 | 第27页 |
| ·重组农杆菌PCR鉴定 | 第27页 |
| ·根癌农杆菌介导水稻转化 | 第27-29页 |
| ·水稻胚性愈伤组织的诱导 | 第27-28页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第28页 |
| ·愈伤组织与根癌农杆菌的共培养 | 第28页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第28页 |
| ·影响根癌农杆菌介导水稻转化的因素分析 | 第28页 |
| ·不同外植体类型(未成熟胚、成熟胚)对转化的影响 | 第28页 |
| ·各种基因型水稻愈伤组织诱导频率的比较 | 第28页 |
| ·各种基因型水稻对G418的敏感性比较 | 第28页 |
| ·乙酰丁香酮对转化频率的影响 | 第28-29页 |
| ·抗性愈伤的分化培养 | 第29页 |
| ·转基因植株的再生及幼苗移栽 | 第29页 |
| ·转基因水稻的分子鉴定 | 第29-34页 |
| ·外源基因整合的检测 | 第29页 |
| ·DNA探针的制备 | 第29页 |
| ·转化植株总DNA提取 | 第29-30页 |
| ·PCR分析 | 第30页 |
| ·转化植株PCR-Southern杂交检测 | 第30-32页 |
| ·转化植株外源基因PCR-SSCP分析 | 第32页 |
| ·转化植株外源基因的序列测定 | 第32-33页 |
| ·外源基因转录的检测 | 第33页 |
| ·转基因水稻总RNA的提取 | 第33页 |
| ·Northern点杂交检测外源基因的转录 | 第33页 |
| ·外源基因表达的检测 | 第33页 |
| ·转基因水稻总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·外源基因表达的ELISA检测 | 第33页 |
| ·外源基因表达的Western印迹分析 | 第33-34页 |
| ·转基因水稻抗病性及遗传分析 | 第34-36页 |
| ·T0代转基因水稻对水稻条纹病毒的抗性分析 | 第34页 |
| ·T0代转基因水稻中水稻条纹病毒SP基因的RT-PCR分析 | 第34-35页 |
| ·T1代转基因水稻的遗传分析及PCR-Southern杂交检测 | 第35页 |
| ·T1代转基因水稻对水稻条纹病毒的抗性分析 | 第35页 |
| ·T1代转基因水稻对水稻草矮病毒的抗性分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-59页 |
| ·RT-PCR扩增SP基因 | 第36页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·序列分析 | 第37页 |
| ·植物表达载体的构建及转化农杆菌 | 第37-41页 |
| ·pEmu-SP植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·pK-SP植物表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·pCB-SP植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·含SP基因的三种植物表达载体转化农杆菌 | 第40-41页 |
| ·根癌农杆菌介导转化水稻 | 第41-46页 |
| ·农杆菌介导的转化系统条件的优化 | 第41-44页 |
| ·成熟胚和未成熟胚来源的愈伤组织诱导 | 第41-42页 |
| ·不同基因型水稻愈伤组织诱导频率比较 | 第42-43页 |
| ·不同基因型水稻对G418的敏感性比较 | 第43页 |
| ·乙酰丁香酮对转化频率的影响 | 第43-44页 |
| ·抗性愈伤的筛选及转基因植株的再生 | 第44-46页 |
| ·转基因水稻的分子鉴定 | 第46-52页 |
| ·外源基因整合的检测 | 第46-50页 |
| ·DNA探针的制备 | 第46-47页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·PCR-Southern杂交检测转化植株 | 第48-49页 |
| ·转基因水稻外源基因PCR-SSCP分析及序列测定 | 第49-50页 |
| ·Northern点杂交检测外源基因的转录 | 第50-51页 |
| ·外源基因表达的检测 | 第51-52页 |
| ·外源基因表达的ELISA检测 | 第51页 |
| ·外源基因表达的Western印迹分析 | 第51-52页 |
| ·转基因水稻抗病性及遗传分析 | 第52-59页 |
| ·T0代转基因水稻对水稻条纹病毒的抗性分析 | 第52-55页 |
| ·T0代转基因水稻中水稻条纹病毒SP基因的RT-PCR分析 | 第55页 |
| ·T1代转基因水稻的遗传分析及PCR-Southern杂交检测 | 第55-57页 |
| ·T1代转基因水稻对水稻条纹病毒的抗性测定 | 第57-58页 |
| ·T1代转基因水稻对水稻草矮病毒的抗性测定 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| ·RGSV SP基因功能的分析 | 第59-60页 |
| ·转基因水稻抗性机理分析 | 第60-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录1 攻硕期间发表(投稿)的论文 | 第73-74页 |
| 附录2 原创性声明 | 第74页 |
