| 摘要 | 第1-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-40页 |
| 1 油茶栽培利用现状 | 第11-12页 |
| 2 植物cDNA文库构建 | 第12-19页 |
| ·基因组文库和cDNA文库 | 第12-13页 |
| ·cDNA文库构建的方法进展 | 第13-16页 |
| ·标准化cDNA文库 | 第13-14页 |
| ·差减cDNA文库 | 第14-16页 |
| ·cDNA文库特点与作用 | 第16-18页 |
| ·用于筛选与性状相关的重要基因 | 第16-17页 |
| ·cDNA文库是EST的研究基础和材料 | 第17页 |
| ·cDNA文库作为SSR引物开发的材料与平台 | 第17页 |
| ·结合DNA芯片技术对植物基因表达谱进行研究 | 第17-18页 |
| ·国内植物cDNA文库构建情况 | 第18-19页 |
| 3 植物EST的研究 | 第19-26页 |
| ·表达序列标签(EST)的产生 | 第19-20页 |
| ·EST的概念 | 第20页 |
| ·EST数据库的构建流程 | 第20-21页 |
| ·EST的特点 | 第21-24页 |
| ·EST优点和作用 | 第21-22页 |
| ·EST缺点与克服 | 第22-24页 |
| ·动、植物EST的构建与基因分离情况 | 第24-25页 |
| ·EST数据库发展迅速 | 第25页 |
| ·EST应用前景 | 第25-26页 |
| 4 植物脂肪酸生物合成关键基因研究 | 第26-37页 |
| ·脂肪酸特点 | 第27页 |
| ·饱和脂肪酸的生物合成酶与基因 | 第27-30页 |
| ·乙酰-CoA羧化酶(ACC) | 第28-29页 |
| ·植物脂肪酸合成酶(FAS) | 第29-30页 |
| ·不饱和脂肪酸的生物合成酶与基因 | 第30-37页 |
| ·脂肪酸的种类和分布 | 第31-32页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·植物脂酰ACP脱饱和酶与基因 | 第32页 |
| ·植物脂酰-脂脱饱和酶与基因 | 第32-33页 |
| ·脂酰CoA脱饱和酶与基因 | 第33-34页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶序列与基因序列分析 | 第34-35页 |
| ·脂肪酸脱饱和的生物学作用 | 第35-37页 |
| ·油酯(TAGs)合成及改良脂肪酸的基因工程 | 第37页 |
| 5 本项研究的目的意义和技术路线 | 第37-40页 |
| ·目的、意义 | 第38页 |
| ·技术路线 | 第38-40页 |
| 第二部分 论文正文 | 第40-119页 |
| 1 油茶种子cDNA文库构建 | 第40-60页 |
| ·实验材料、试剂与设备 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·试剂与器皿 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·总RNA的提取 | 第41-43页 |
| ·变性裂解液法提取总RNA | 第41-42页 |
| ·CTAB法提取总RNA | 第42-43页 |
| ·RNA浓度及纯度测定 | 第43页 |
| ·RNA尿素变性琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·mRNA浓度、纯度及电泳测定 | 第44页 |
| ·cDNA的合成 | 第44-49页 |
| ·SuperScriptⅡ-RT合成第一链 | 第44-45页 |
| ·第二链cDNA的合成 | 第45页 |
| ·双链cDNA末端补平: | 第45-46页 |
| ·加接头: | 第46页 |
| ·双链cDNA末端的磷酸化及XhoⅠ酶切: | 第46-47页 |
| ·cDNA回收 | 第47页 |
| ·cDNA与质粒载体的连接 | 第47-48页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·向E.coli中导入重组的cDNA | 第48-49页 |
| ·cDNA文库的保存 | 第49页 |
| ·cDNA文库质量测定 | 第49页 |
| ·库容量测定 | 第49页 |
| ·计算重组子的百分比 | 第49页 |
| ·cDNA文库重组克隆插入片段的大小测定 | 第49-51页 |
| ·DH10B菌液培养 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第50-51页 |
| ·菌落PCR扩增鉴定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·油茶种子总RNA和mRNA提取浓度和纯度检测 | 第51-52页 |
| ·cDNA回收与连接结果 | 第52页 |
| ·cDNA文库库容量测定结果 | 第52-53页 |
| ·油茶种子cDNA文库中插入片段的大小检测 | 第53-55页 |
| ·cDNA文库的重组率 | 第55页 |
| ·cDNA克隆片段长度 | 第55-56页 |
| ·小结与讨论 | 第56-60页 |
| ·关于油茶种子总RNA的提取与mRNA的分离 | 第56-57页 |
| ·cDNA文库构建应注意的几个问题 | 第57-58页 |
| ·构建油茶种子cDNA文库的载体选择 | 第58页 |
| ·油茶种子cDNA文库的作用 | 第58-60页 |
| 2 油茶EST数据生物信息学分析 | 第60-84页 |
| ·实验材料和方法 | 第60-62页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·油茶种子cDNA文库构建 | 第60页 |
| ·油茶种子EST文库构建 | 第60-62页 |
| ·试剂与培养基 | 第60-61页 |
| ·质粒DNA提取 | 第61-62页 |
| ·EST序列的分析方法 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-80页 |
| ·克隆测序与EST功能分类 | 第62-64页 |
| ·油茶种子EST文库与贮藏蛋白有关的基因 | 第64-69页 |
| ·油茶种子的贮藏蛋白基因 | 第64页 |
| ·油体蛋白(Oleosin)基因表达 | 第64-66页 |
| ·油茶种子EST文库中的遍在蛋白基因 | 第66-69页 |
| ·与蛋白降解有关的基因 | 第69页 |
| ·与抗病有关的基因 | 第69-70页 |
| ·与脂肪酸、蜡代谢有关的基因 | 第70-72页 |
| ·脂酰ACP硫酯酶基因 | 第70页 |
| ·硬脂酰-ACP脱饱和酶基因 | 第70-71页 |
| ·油酸脱饱和酶等基因 | 第71页 |
| ·酰基载体蛋白基因 | 第71-72页 |
| ·蜡质合成代谢基因 | 第72页 |
| ·油茶种子EST文库中的重金属解毒蛋白基因 | 第72-73页 |
| ·油茶种子EST文库中的组蛋白基因 | 第73-74页 |
| ·油茶表达的适应温度逆境的基因 | 第74页 |
| ·参与肽链折叠的蛋白因子基因 | 第74-75页 |
| ·油茶种子EST中植物肌动蛋白基因 | 第75-77页 |
| ·油茶种子胚胎发育和基因表达 | 第77-78页 |
| ·油茶种子EST中的脱落酸应答蛋白基因 | 第78页 |
| ·与次生代谢物质的防卫反应有关的基因 | 第78-79页 |
| ·油茶种子ACS基因 | 第79-80页 |
| ·油茶种子EST库中的其它基因 | 第80页 |
| ·小结与讨论 | 第80-84页 |
| ·首次成功地构建了油茶种子的EST文库 | 第81页 |
| ·首次获得了油茶种子中大量特异性表达的新基因与表达分析 | 第81-82页 |
| ·关于油茶种子EST文库构建的讨论 | 第82-84页 |
| 3 脂肪酸合成基因的分离和鉴定 | 第84-116页 |
| ·材料与方法 | 第84-86页 |
| ·材料 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-116页 |
| ·油茶SAD脱饱和酶基因分离和鉴定 | 第86-95页 |
| ·生物信息学分析 | 第86-95页 |
| ·与GenBank其它物种比对结果 | 第86-87页 |
| ·SAD基因相似性比较及聚类分析 | 第87-89页 |
| ·SAD脱饱和酶氨基酸序列比较 | 第89-93页 |
| ·SAD基因的DNA扩增 | 第93-95页 |
| ·油茶FAD2基因的基因组分离鉴定 | 第95-107页 |
| ·油茶种子FAD2基因cDNA序列 | 第95页 |
| ·不同油茶基因组材料的PCR结果 | 第95-96页 |
| ·油茶与其它物种的FAD2基因cDNA序列比较 | 第96-107页 |
| ·保守区比较 | 第100页 |
| ·FAD2基因相似性表比较 | 第100页 |
| ·油茶种子FAD2基因推导转录的氨基酸序列与其它物种的比较 | 第100-107页 |
| ·油茶种子FAD2基因cDNA的酶切位点 | 第107页 |
| ·与油脂贮藏有关基因oleosin分离和鉴定 | 第107-110页 |
| ·Oleosin基因的cDNA序列 | 第107页 |
| ·Oleosin基因与其它物种的Oleosin基因序列比较结果 | 第107-110页 |
| ·油茶种子ACP基因分离鉴定 | 第110-116页 |
| ·油茶种子ACP基因的cDNA序列 | 第110-111页 |
| ·油茶种子ACP基因与其它物种的ACP基因的聚类与相似性比较 | 第111-113页 |
| ·小结与讨论 | 第113-116页 |
| ·分离鉴定了油茶种子硬脂酰ACP脱饱和酶(SAD)基因 | 第113-114页 |
| ·分离鉴定了油茶种子油酸脱氢酶(FAD2)基因 | 第114页 |
| ·分离并鉴定了油茶种子的Oleosin基因 | 第114-115页 |
| ·分离鉴定了油茶种子ACP基因。 | 第115-116页 |
| 4 结论与创新点 | 第116-119页 |
| ·结论 | 第116-118页 |
| ·成功地构建了油茶种子cDNA文库 | 第116页 |
| ·成功地构建立了油茶种子EST文库 | 第116页 |
| ·对近成熟种子EST文库的基因表达分析 | 第116-117页 |
| ·从油茶种子中分离鉴定了脂肪酸合成关键基因SAD | 第117页 |
| ·成功地分离鉴定了油茶种子中脂肪酸合成关键基因FAD2基因 | 第117页 |
| ·成功地分离鉴定了油茶油体蛋白基因 | 第117页 |
| ·成功地分离鉴定了油茶种子ACP基因 | 第117-118页 |
| ·创新点 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-134页 |
| ABSTRACT | 第134-137页 |
| 附录 | 第137-151页 |
| 附录A 试剂和配方 | 第137-139页 |
| 附录B 作者简介 | 第139-141页 |
| 附录C 油茶种子脂肪酸、油脂合成的部分基因测序图 | 第141-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
