| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-20页 |
| 上篇 文献综述 | 第20-53页 |
| 第一章 针叶树组织培养研究进展 | 第20-43页 |
| 1 针叶树的器官发生与快速繁殖 | 第20-29页 |
| 1．1 直接器官发生与植株再生 | 第20-27页 |
| 1．1．1 不定芽 | 第20-25页 |
| 1．1．1．1 芽原基的诱导 | 第21页 |
| 1．1．1．2 不定芽的发育和伸长 | 第21页 |
| 1．1．1．3 不定根的诱导 | 第21-25页 |
| 1．1．1．4 再生植株的移栽 | 第25页 |
| 1．1．2 定芽 | 第25-27页 |
| 1．2 间接器官发生与植株再生 | 第27页 |
| 1．3 器官发生的形态学和组织学研究 | 第27-28页 |
| 1．3．1 器官发生的形态学 | 第27-28页 |
| 1．3．2 器官发生的组织学研究 | 第28页 |
| 1．4 遗传稳定性研究 | 第28页 |
| 1．5 应用前景 | 第28-29页 |
| 1．5．1 种质保存 | 第28-29页 |
| 1．5．2 加速繁殖优良无性系 | 第29页 |
| 1．5．3 基因转导 | 第29页 |
| 2 针叶树体细胞胚胎发生与植株再生 | 第29-43页 |
| 2．1 国内外研究进展 | 第29-34页 |
| 2．1．1 国际研究进展 | 第29-33页 |
| 2．1．2 国内研究进展 | 第33-34页 |
| 2．2 针叶树体胚发生及其影响因素 | 第34-37页 |
| 2．2．1 体细胞胚胎发生过程 | 第34-35页 |
| 2．2．1．1 愈伤组织的诱导 | 第34页 |
| 2．2．1．2 胚性愈伤组织的诱导和增殖 | 第34-35页 |
| 2．2．1．3 体胚的发育和成熟 | 第35页 |
| 2．2．1．4 体胚萌发和植株再生 | 第35页 |
| 2．2．2 影响针叶树体细胞胚胎发生的因素 | 第35-37页 |
| 2．2．2．1 基因型对体胚发生的影响 | 第35页 |
| 2．2．2．2 外植体的种类及其生理状态对体胚发生的影响 | 第35-36页 |
| 2．2．2．3 外植体的预处理对体胚发生的影响 | 第36页 |
| 2．2．2．4 基本培养基对体胚发生的影响 | 第36页 |
| 2．2．2．5 植物激素的影响 | 第36-37页 |
| 2．2．2．6 AgNO_3的影响 | 第37页 |
| 2．2．2．7 PEG及活性炭的影响 | 第37页 |
| 2．3 体细胞胚胎发生的细胞学和分子生物学研究 | 第37-38页 |
| 2．3．1 细胞生物学研究 | 第37-38页 |
| 2．3．2 分子生物学研究 | 第38页 |
| 2．4 应用前景 | 第38-43页 |
| 2．4．1 快速繁殖优良无性系 | 第38-40页 |
| 2．4．2 人工种子的研制 | 第40-41页 |
| 2．4．3 基因转导 | 第41页 |
| 2．4．4 种质保存 | 第41页 |
| 2．4．5 筛选突变体 | 第41页 |
| 2．4．6 原生质体培养 | 第41-43页 |
| 第二章 针叶树种遗传转化研究进展 | 第43-53页 |
| 1 农杆菌介导的针叶树遗传转化 | 第43-44页 |
| 2 基因枪法 | 第44-49页 |
| 3 电击法 | 第49-50页 |
| 4 PEG法 | 第50页 |
| 5 针叶树种遗传转化存在的主要问题及解决办法 | 第50-51页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第51-53页 |
| 下篇 研究报告 | 第53-111页 |
| 第三章 杉木愈伤组织的诱导及植株再生 | 第53-66页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料和方法 | 第53-56页 |
| 2．1 实验材料 | 第53页 |
| 2．1．1 成熟合子胚 | 第53页 |
| 2．1．2 未成熟合子胚 | 第53页 |
| 2．2 实验方法 | 第53-56页 |
| 2．2．1 消毒与接种 | 第53-54页 |
| 2．2．1．1 成熟种子 | 第53页 |
| 2．2．1．2 未成熟种子 | 第53-54页 |
| 2．2．2 培养基与培养条件 | 第54-55页 |
| 2．2．2．1 培养基 | 第54-55页 |
| 2．2．2．2 培养条件 | 第55页 |
| 2．2．3 数据统计方法 | 第55-56页 |
| 2．2．3．1 愈伤组织的诱导 | 第55页 |
| 2．2．3．2 愈伤组织的继代和增殖 | 第55-56页 |
| 2．2．3．3 不定芽的诱导 | 第56页 |
| 3 实验结果与分析 | 第56-64页 |
| 3．1 愈伤组织的诱导 | 第56-61页 |
| 3．1．1 成熟合子胚 | 第56-58页 |
| 3．1．1．1 2，4-D浓度的影响 | 第56页 |
| 3．1．1．2 6-BA、KT浓度的影响 | 第56-57页 |
| 3．1．1．3 基本培养基的影响 | 第57页 |
| 3．1．1．4 蔗糖浓度的影响 | 第57-58页 |
| 3．1．2 未成熟合子胚 | 第58-61页 |
| 3．1．2．1 合子胚的发育阶段对愈伤组织诱导的影响 | 第58-61页 |
| 3．2 愈伤组织的继代和增殖 | 第61-62页 |
| 3．2．1 2，4-D浓度的影响 | 第61页 |
| 3．2．2 基本培养基的影响 | 第61页 |
| 3．2．3 凝固剂的影响 | 第61-62页 |
| 3．3 体细胞胚的诱导 | 第62页 |
| 3．4 不定芽的诱导 | 第62-63页 |
| 3．4．1 基本培养基的影响 | 第62-63页 |
| 3．4．2 6-BA、KT浓度的影响 | 第63页 |
| 3．4 生根培养 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 4．1 合子胚的发育阶段与愈伤组织诱导 | 第64页 |
| 4．2 基本培养基与愈伤组织诱导和不定芽分化 | 第64页 |
| 4．3 愈伤组织的状态与继代增殖和不定芽分化 | 第64-66页 |
| 第四章 杉木直接器官发生和体胚发生研究 | 第66-84页 |
| 1 前言 | 第66页 |
| 2 材料和方法 | 第66-68页 |
| 2．1 实验材料 | 第66页 |
| 2．2 实验方法 | 第66-68页 |
| 2．2．1 消毒与接种 | 第66页 |
| 2．2．1．1 成熟合子胚 | 第66页 |
| 2．2．1．2 实生苗子叶和下胚轴 | 第66页 |
| 2．2．2 培养基与培养条件 | 第66-67页 |
| 2．2．2．1 培养基 | 第66-67页 |
| 2．2．2．2 培养条件 | 第67页 |
| 2．2．3 数据统计方法 | 第67页 |
| 2．2．3．1 不定芽和体胚的诱导频率 | 第67页 |
| 2．2．3．2 诱导的平均不定芽数 | 第67页 |
| 2．2．3．3 不定芽的形成能力(Bud forming capacity) | 第67页 |
| 2．2．3．4 不定根的诱导频率和平均根数 | 第67页 |
| 2．2．3．5 不定根的形成能力(Root forming capacity) | 第67页 |
| 2．2．4 石蜡切片方法 | 第67-68页 |
| 3 实验结果与分析 | 第68-78页 |
| 3．1 不定芽和体胚的诱导 | 第68-76页 |
| 3．1．1 基本培养基对不定芽和体胚发生的影响 | 第68-69页 |
| 3．1．2 6-BA浓度对不定芽和体胚发生的影响 | 第69-76页 |
| 3．2 不定芽的伸长和体细胞胚的萌发 | 第76-77页 |
| 3．3 不定芽的生根 | 第77页 |
| 3．4 不定芽和体胚发生的组织学观察 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-84页 |
| 4．1 基因型与体胚发生频率 | 第78页 |
| 4．2 TDZ的效应 | 第78-79页 |
| 4．3 苗龄与子叶和下胚轴的不定芽和体胚发生频率 | 第79页 |
| 4．4 子叶和下胚轴不定芽的极性发生 | 第79-84页 |
| 第五章 杉木遗传转化受体系统的建立 | 第84-94页 |
| 1 前言 | 第84页 |
| 2 材料和方法 | 第84-85页 |
| 2．1 实验材料 | 第84页 |
| 2．2 实验方法 | 第84-85页 |
| 2．2．1 外植体的获得 | 第84页 |
| 2．2．2 培养基 | 第84-85页 |
| 2．2．2．1 芽诱导培养基 | 第84页 |
| 2．2．2．2 芽伸长培养基 | 第84页 |
| 2．2．2．3 生根培养基 | 第84-85页 |
| 2．2．3 培养条件 | 第85页 |
| 2．2．4 数据统计方法 | 第85页 |
| 2．2．4．1 芽诱导频率 | 第85页 |
| 2．2．4．2 平均芽数 | 第85页 |
| 2．2．4．3 芽形成能力 | 第85页 |
| 2．2．5 石蜡切片方法 | 第85页 |
| 3 实验结果与分析 | 第85-90页 |
| 3．1 6-BA浓度对芽诱导的影响 | 第85页 |
| 3．2 TDZ浓度对芽诱导的影响 | 第85-86页 |
| 3．3 蔗糖浓度对芽诱导的影响 | 第86页 |
| 3．4 预培养时间对芽诱导的影响 | 第86-87页 |
| 3．5 Cef对芽诱导的影响 | 第87页 |
| 3．6 Km对芽诱导及伸长生长的影响 | 第87-88页 |
| 3．7 Km对生根的影响 | 第88-90页 |
| 3．8 芽发生的组织学观察 | 第90页 |
| 4 讨论 | 第90-94页 |
| 4．1 细胞分裂素浓度与芽的伸长生长 | 第90页 |
| 4．2 接受转化的细胞与再生细胞的一致性 | 第90-91页 |
| 4．3 芽的发育阶段与Km抗性 | 第91-94页 |
| 第六章 杉木转天麻抗真菌蛋白基因研究 | 第94-108页 |
| 1 前言 | 第94页 |
| 2 材料和方法 | 第94-99页 |
| 2．1 实验材料 | 第94-96页 |
| 2．1．1 植物材料 | 第94页 |
| 2．1．2 试剂 | 第94页 |
| 2．1．3 质粒和菌株 | 第94-95页 |
| 2．1．4 PCR扩增引物 | 第95页 |
| 2．1．5 培养基 | 第95页 |
| 2．1．5．1 农杆菌培养基 | 第95页 |
| 2．1．5．2 茎段培养基 | 第95页 |
| 2．1．6 仪器与设备 | 第95-96页 |
| 2．2 实验方法 | 第96-99页 |
| 2．2．1 碱法少量提取质粒DNA | 第96页 |
| 2．2．2 农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第96页 |
| 2．2．3 液氮冻融法转化农杆菌EHA105 | 第96-97页 |
| 2．2．4 杉木茎段遗传转化方法 | 第97页 |
| 2．2．5 影响杉木遗传转化效率的因素 | 第97-98页 |
| 2．2．6 分步筛选培养和Km~r芽的获得 | 第98页 |
| 2．2．7 Km~r芽的PCR检测 | 第98-99页 |
| 2．2．7．1 Km~r芽的总DNA提取 | 第98-99页 |
| 2．2．7．2 PCR反应 | 第99页 |
| 3 实验结果与分析 | 第99-105页 |
| 3．1 提取质粒pBin35SGAFP并转化农杆菌EHA105 | 第99页 |
| 3．2 预培养时间对产生Km~r芽的影响 | 第99-101页 |
| 3．3 浸染菌液的浓度对产生Km~r芽的影响 | 第101页 |
| 3．4 浸染时间对产生Km~r芽的影响 | 第101-102页 |
| 3．5 共培养时间对产生Km~r芽的影响 | 第102-103页 |
| 3．6 共培养基的pH对产生Km~r芽的影响 | 第103页 |
| 3．7 共培养基中AS浓度对产生Km~r芽的影响 | 第103-104页 |
| 3．8 Km~r添加的时机对产生Km~r芽的影响 | 第104页 |
| 3．9 大量K~r芽的获得 | 第104-105页 |
| 3．10 Km~r芽的PCR检测 | 第105页 |
| 4 讨论 | 第105-108页 |
| 4．1 农杆菌转化子的检测时机 | 第105页 |
| 4．2 不同因素对转化效果的贡献 | 第105-106页 |
| 4．3 分步筛选策略的确定 | 第106-108页 |
| 第七章 主要结论和进一步研究的展望 | 第108-111页 |
| 1 主要结论 | 第108-109页 |
| 1．1 间接器官发生与植株再生 | 第108页 |
| 1．2 合子胚、子叶、下胚轴直接器官发生及体胚发生 | 第108-109页 |
| 1．3 转基因受体系统的建立 | 第109页 |
| 1．4 遗传转化体系的建立 | 第109页 |
| 2 存在问题及进一步研究的展望 | 第109-111页 |
| 2．1 间接体胚发生体系的研究 | 第109页 |
| 2．2 子叶和下胚轴不定芽极性发生的机理探讨 | 第109-110页 |
| 2．3 Km抗性芽的进一步分子检测 | 第110页 |
| 2．4 辅助处理及多种转化方法相结合 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
