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杨树木质素合成酶PAL基因的克隆、鉴定及其表达载体的构建

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-8页
文中简写符号第8-17页
第一章 木质素生物合成途径研究进展第17-54页
 1. 前言第17-18页
 2. 木质素的组成与分类第18-19页
 3. 木质素的生物合成途径第19-39页
  3.1 单体的生物合成第19-34页
   3.1.1 苯丙烷(Phenypropanoid)途径第20-30页
    (1) 苯丙氨酸氨解酶(PhenylalanineAmmonia-Lyase,PAL)第20-23页
    (2) 苯乙烯酸4-脱氢酶(CinnamicAcid4-Hydroxylase,C4H)第23-24页
    (3) 对羟基苯乙烯酸3-脱氢酶(CoumaricAcid3-Hydroxylase,C3H)第24页
    (4) 对羟基苯乙烯酰CoA-3-脱氢酶(Coumaroyl-CoA3-Hydroxylase,CCoA3H)第24-25页
    (5) 双重咖啡酸/5-羟基阿魏酸O-甲基转移酶(BispecificCaffeicAcid/5-HydroxyferulicAcidO-Methyltransferase,COMT)第25-26页
    (6) 咖啡酰CoA-O-甲基转移酶(Caffeoyl-CoAO-methytransferase,CCoAOMT)第26-27页
    (7) 阿魏酸5-脱氢酶(FerulicAcid5-Hydroxylase,F5H)第27-28页
    (8) 4 -肉桂酸CoA连接酶(4-Coumarate:CoALigase,4CL)第28-30页
   3.1.2 木质素特异的途径第30-34页
    (1) 肉桂酰CoA还原酶(Cinnamoyl-CoAReductase,CCR)第30-31页
    (2) 肉桂醇脱氢酶(CinnamylAlcoholDehydrogenase,CAD)第31-34页
  3.2 木质素单体的糖基化(Glycosylation)贮藏和运输第34-36页
   (1) UDPG:松柏醇糖苷转移酶第35-36页
   (2) 松柏苷β-糖苷酶第36页
  3.3 酶的氧化聚合作用--木质素单体聚合成木质素第36-39页
   (1) 过氧化物酶第37-38页
   (2) 漆酶第38-39页
 4. 对木质素含量和组成的研究第39-46页
  4.1. 木质素突变体第39-40页
  4.2. 在木质素生物合成途径特殊步骤中的化学抑制剂第40-41页
  4.3. 木质素的基因工程第41-46页
 5. 裸子植物和被子植物木质素的不同第46-47页
 6. 木质素的经济重要性第47-49页
  6.1 造纸(Pulping)第47-48页
  6.2 消化性第48-49页
  6.3 植物抗病第49页
 7. 木质素研究中尚需澄清的问题第49-52页
  7.1 木质素是否高度有序第49-50页
  7.2 不同单体的特异性如何控制第50-51页
  7.3 编码木质素生物合成的基因是如何调节的第51页
  7.4 木质素在细胞壁上的沉积如何控制第51-52页
 8. 本实验的目的和意义第52页
 9. 拟采取的方法和路线第52-54页
第二章 杨树DNA的提取及目的酶基因引物的筛选第54-59页
 1. 材料和试剂第54页
 2. 实验方法第54-57页
  2.1 植物DNA的提取第54-55页
  2.2 引物的设计第55页
  2.3 杨树DNA的PCR扩增第55-56页
  2.4 1%琼脂糖凝胶电泳分析第56-57页
 3. 结果分析第57页
 4. 讨论第57-59页
第三章 杨树次生木质部PAL基因的RT-PCR扩增、克隆及其鉴定第59-77页
 1. 材料和试剂第59-60页
 2. 研究方法与步骤第60-66页
  2.1 杨树次生木质部mRNA的提取及目的片段的获得第60-63页
  2.2 目的片段与T-载体的直接连接第63页
  2.3 感受态细胞的制备(CaCl2法)第63页
  2.4 重组质粒的转化第63-64页
  2.5 质粒的小量提取、纯化、酶切第64-65页
  2.6 质粒的酶切鉴定第65页
  2.7 重组克隆的扩增鉴定及测序分析鉴定第65-66页
 3. 结果与分析第66-74页
  3.1 植物次生木质部中mRNA含量及性质的鉴定第66-67页
  3.2 目的基因片断的克隆及鉴定第67页
  3.3 重组质粒的鉴定第67-69页
  3.4 重组质粒的测序鉴定第69-72页
  3.5 扩增的PAL片段与原序列相似度的比较第72-74页
 4. 讨论第74-77页
第四章 中间载体的构建第77-87页
 1. 材料第77页
 2. 实验方法第77-79页
  2.1 pGEM-T-PAL质粒、载体pGEM-7Zf(+)的酶切第77-79页
  2.2 目的PAL片段和去磷酸化的pGEM-7Zf(+)酶切载体的连接第79页
  2.3 重组质粒的转化第79页
  2.4 重组克隆的鉴定及测序分析第79页
 3. 结果与分析第79-85页
  3.1 pGEM-T-PAL重组质粒的EcoRI酶切第79-80页
  3.2 重组质粒的鉴定第80-85页
 4. 讨论第85-87页
  4.1. 载体的选择第85页
  4.2. pGEM-7Zf(+)EcoRI单酶切后的去磷酸化第85-87页
第五章 表达载体的构建第87-95页
 1. 材料和方法第87页
 2. 方法第87-88页
  2.1 正义PAL植物表达载体的构建第87-88页
  2.2 反义PAL植物表达载体的构建第88页
 3. 结果与分析第88-91页
  3.1. 中间载体的酶切第88-89页
  3.2. 质粒pBI121的双酶切第89页
  3.3. 质粒pBin438的双酶切第89-90页
  3.4. 重组质粒的鉴定第90-91页
 4. 讨论第91-95页
第六章 农杆菌的转化及转基因杨树的再生第95-99页
结论第99-101页
课题研究展望第101-102页
参考文献第102-122页
致谢第122-124页
简介第124-125页

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