中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
文中简写符号 | 第8-17页 |
第一章 木质素生物合成途径研究进展 | 第17-54页 |
1. 前言 | 第17-18页 |
2. 木质素的组成与分类 | 第18-19页 |
3. 木质素的生物合成途径 | 第19-39页 |
3.1 单体的生物合成 | 第19-34页 |
3.1.1 苯丙烷(Phenypropanoid)途径 | 第20-30页 |
(1) 苯丙氨酸氨解酶(PhenylalanineAmmonia-Lyase,PAL) | 第20-23页 |
(2) 苯乙烯酸4-脱氢酶(CinnamicAcid4-Hydroxylase,C4H) | 第23-24页 |
(3) 对羟基苯乙烯酸3-脱氢酶(CoumaricAcid3-Hydroxylase,C3H) | 第24页 |
(4) 对羟基苯乙烯酰CoA-3-脱氢酶(Coumaroyl-CoA3-Hydroxylase,CCoA3H) | 第24-25页 |
(5) 双重咖啡酸/5-羟基阿魏酸O-甲基转移酶(BispecificCaffeicAcid/5-HydroxyferulicAcidO-Methyltransferase,COMT) | 第25-26页 |
(6) 咖啡酰CoA-O-甲基转移酶(Caffeoyl-CoAO-methytransferase,CCoAOMT) | 第26-27页 |
(7) 阿魏酸5-脱氢酶(FerulicAcid5-Hydroxylase,F5H) | 第27-28页 |
(8) 4 -肉桂酸CoA连接酶(4-Coumarate:CoALigase,4CL) | 第28-30页 |
3.1.2 木质素特异的途径 | 第30-34页 |
(1) 肉桂酰CoA还原酶(Cinnamoyl-CoAReductase,CCR) | 第30-31页 |
(2) 肉桂醇脱氢酶(CinnamylAlcoholDehydrogenase,CAD) | 第31-34页 |
3.2 木质素单体的糖基化(Glycosylation)贮藏和运输 | 第34-36页 |
(1) UDPG:松柏醇糖苷转移酶 | 第35-36页 |
(2) 松柏苷β-糖苷酶 | 第36页 |
3.3 酶的氧化聚合作用--木质素单体聚合成木质素 | 第36-39页 |
(1) 过氧化物酶 | 第37-38页 |
(2) 漆酶 | 第38-39页 |
4. 对木质素含量和组成的研究 | 第39-46页 |
4.1. 木质素突变体 | 第39-40页 |
4.2. 在木质素生物合成途径特殊步骤中的化学抑制剂 | 第40-41页 |
4.3. 木质素的基因工程 | 第41-46页 |
5. 裸子植物和被子植物木质素的不同 | 第46-47页 |
6. 木质素的经济重要性 | 第47-49页 |
6.1 造纸(Pulping) | 第47-48页 |
6.2 消化性 | 第48-49页 |
6.3 植物抗病 | 第49页 |
7. 木质素研究中尚需澄清的问题 | 第49-52页 |
7.1 木质素是否高度有序 | 第49-50页 |
7.2 不同单体的特异性如何控制 | 第50-51页 |
7.3 编码木质素生物合成的基因是如何调节的 | 第51页 |
7.4 木质素在细胞壁上的沉积如何控制 | 第51-52页 |
8. 本实验的目的和意义 | 第52页 |
9. 拟采取的方法和路线 | 第52-54页 |
第二章 杨树DNA的提取及目的酶基因引物的筛选 | 第54-59页 |
1. 材料和试剂 | 第54页 |
2. 实验方法 | 第54-57页 |
2.1 植物DNA的提取 | 第54-55页 |
2.2 引物的设计 | 第55页 |
2.3 杨树DNA的PCR扩增 | 第55-56页 |
2.4 1%琼脂糖凝胶电泳分析 | 第56-57页 |
3. 结果分析 | 第57页 |
4. 讨论 | 第57-59页 |
第三章 杨树次生木质部PAL基因的RT-PCR扩增、克隆及其鉴定 | 第59-77页 |
1. 材料和试剂 | 第59-60页 |
2. 研究方法与步骤 | 第60-66页 |
2.1 杨树次生木质部mRNA的提取及目的片段的获得 | 第60-63页 |
2.2 目的片段与T-载体的直接连接 | 第63页 |
2.3 感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第63页 |
2.4 重组质粒的转化 | 第63-64页 |
2.5 质粒的小量提取、纯化、酶切 | 第64-65页 |
2.6 质粒的酶切鉴定 | 第65页 |
2.7 重组克隆的扩增鉴定及测序分析鉴定 | 第65-66页 |
3. 结果与分析 | 第66-74页 |
3.1 植物次生木质部中mRNA含量及性质的鉴定 | 第66-67页 |
3.2 目的基因片断的克隆及鉴定 | 第67页 |
3.3 重组质粒的鉴定 | 第67-69页 |
3.4 重组质粒的测序鉴定 | 第69-72页 |
3.5 扩增的PAL片段与原序列相似度的比较 | 第72-74页 |
4. 讨论 | 第74-77页 |
第四章 中间载体的构建 | 第77-87页 |
1. 材料 | 第77页 |
2. 实验方法 | 第77-79页 |
2.1 pGEM-T-PAL质粒、载体pGEM-7Zf(+)的酶切 | 第77-79页 |
2.2 目的PAL片段和去磷酸化的pGEM-7Zf(+)酶切载体的连接 | 第79页 |
2.3 重组质粒的转化 | 第79页 |
2.4 重组克隆的鉴定及测序分析 | 第79页 |
3. 结果与分析 | 第79-85页 |
3.1 pGEM-T-PAL重组质粒的EcoRI酶切 | 第79-80页 |
3.2 重组质粒的鉴定 | 第80-85页 |
4. 讨论 | 第85-87页 |
4.1. 载体的选择 | 第85页 |
4.2. pGEM-7Zf(+)EcoRI单酶切后的去磷酸化 | 第85-87页 |
第五章 表达载体的构建 | 第87-95页 |
1. 材料和方法 | 第87页 |
2. 方法 | 第87-88页 |
2.1 正义PAL植物表达载体的构建 | 第87-88页 |
2.2 反义PAL植物表达载体的构建 | 第88页 |
3. 结果与分析 | 第88-91页 |
3.1. 中间载体的酶切 | 第88-89页 |
3.2. 质粒pBI121的双酶切 | 第89页 |
3.3. 质粒pBin438的双酶切 | 第89-90页 |
3.4. 重组质粒的鉴定 | 第90-91页 |
4. 讨论 | 第91-95页 |
第六章 农杆菌的转化及转基因杨树的再生 | 第95-99页 |
结论 | 第99-101页 |
课题研究展望 | 第101-102页 |
参考文献 | 第102-122页 |
致谢 | 第122-124页 |
简介 | 第124-125页 |