英文缩写 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
前言 | 第13-15页 |
实验材料 | 第15-21页 |
一、细胞培养及试剂 | 第15页 |
二、放免试剂 | 第15页 |
三、RT-PCR和Southern杂交试剂、引物、探针 | 第15-16页 |
四、细菌菌株和质粒载体 | 第16-19页 |
五、克隆质粒所用酶类及分子量Marker | 第19页 |
六、PCR扩增引物 | 第19-20页 |
七、克隆质粒DNA序列分析试剂 | 第20页 |
八、转染试剂 | 第20页 |
九、仪器 | 第20-21页 |
实验方法 | 第21-33页 |
一、本研究的技术路线 | 第21-22页 |
二、细胞培养及rhIL1β刺激实验 | 第22页 |
三、RIA测定ir-ACTH含量 | 第22-23页 |
四、AtT20细胞总RNA提取 | 第23-24页 |
五、RT-PCR扩增POMC cDNA | 第24页 |
六、Southern杂交及分析 | 第24-26页 |
七、质粒DNA制备 | 第26-27页 |
八、质粒DNA重组 | 第27-29页 |
九、质粒DNA的双链测序 | 第29-30页 |
十、质粒DNA的纯化 | 第30页 |
十一、重组荧光素酶报告基因真核表达质粒转染AtT20细胞及rhIL1β刺激实验 | 第30-31页 |
十二、荧光素酶活性及β-Gal活性测定 | 第31-33页 |
结果 | 第33-60页 |
一、rhIL1β对AtT20细胞ir-ACTH分泌的影响 | 第33-34页 |
二、rhIL1β对AtT20细胞POMC mRNA水平的影响 | 第34-37页 |
三、大鼠POMC基因5’上游近端调控序列报告基因质粒的重组 | 第37-41页 |
四、重组质粒的酶切电泳图谱分析及核苷酸序列测定 | 第41-49页 |
五、pGL2-POMCs重组质粒在AtT20细胞中的转录调控活性测定 | 第49-60页 |
讨论 | 第60-67页 |
一、rhIL1β对AtT20细胞ACTH分泌和POMC基因表达的影响 | 第60-61页 |
二、POMC基因基础表达的调控 | 第61-63页 |
三、IL1β对POMC基因(-480/+63bp)片段转录调控的影响 | 第63-64页 |
四、AP1位点在IL1β诱导POMC基因转录调控中的作用 | 第64-65页 |
五、POMC基因5’上游(-480/-34bp)调控序列中存在IL1β可诱导的调控位点 | 第65-67页 |
结论 | 第67-68页 |
综述 | 第68-77页 |
参考文献 | 第77-90页 |
致谢 | 第90-91页 |
个人简历 | 第91页 |