| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| 1 嗜热自养甲烷杆菌 | 第12-17页 |
| 2 蛋白质折叠 | 第17-21页 |
| 3 二硫键异构酶 | 第21-31页 |
| ·真核蛋白质二硫键异构酶PDI | 第22-29页 |
| ·大肠杆菌Dsb C | 第29-31页 |
| ·古菌的二硫键氧化还原酶 | 第31页 |
| 4 本研究的目的和内容 | 第31-32页 |
| 5 参考文献 | 第32-36页 |
| 第二章 嗜热自养甲烷杆菌DX01的分离纯化和特征研究 | 第36-55页 |
| 1 引言 | 第36-37页 |
| 2 材料 | 第37-38页 |
| ·试验材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 3 方法 | 第38-45页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌的分离纯——Hungate技术 | 第38-39页 |
| ·102G气相色谱仪的参数 | 第39页 |
| ·透射式电子显微镜观察 | 第39页 |
| ·嗜热自养甲烷菌DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·16S rDNA的克隆 | 第40-41页 |
| ·G+C mol%的测定 | 第41-42页 |
| ·DNA-DNA杂交 | 第42-43页 |
| ·PCR介导的DNA指纹图谱分析(PCR Melting Profiles) | 第43-45页 |
| ·SDS-PAGE | 第45页 |
| ·蛋白质N末端测序 | 第45页 |
| ·甲基辅酶M还原酶I的克隆 | 第45页 |
| 4 结果 | 第45-53页 |
| ·M.thermoautotrophicus DX01的形态特征和生理生化分析 | 第45-51页 |
| ·M.thermoautotrophicus DX01抗胁迫蛋白质的分离与纯化 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-54页 |
| 6 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章 二硫键异构酶(MTH1745)的表达特征研究 | 第55-66页 |
| 1 引言 | 第55-56页 |
| 2 材料 | 第56页 |
| ·试验材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| 3 方法 | 第56-61页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌ΔH~T的培养——Hungate技术 | 第56-57页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌ΔH~T在不同温度的培养和冷激处理 | 第57页 |
| ·RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·反转录(RT) | 第58页 |
| ·Real-time PCR | 第58-61页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌ΔH~T 16S rDNA的TA克隆 | 第58-60页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)的TA克隆 | 第60页 |
| ·定量PCR | 第60-61页 |
| 4 结果 | 第61-64页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因ORF的克隆 | 第61页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因ORF和16S rDNA部分片段的克隆 | 第61-62页 |
| ·不同培养温度对二硫键异构酶(MTH1745)mRNA表达的影响 | 第62-63页 |
| ·冷激处理对二硫键异构酶(MTH1745)mRNA表达的影响 | 第63-64页 |
| 5 讨论 | 第64-65页 |
| 6 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 MTH1745对大肠杆菌热耐受性影响和过表达体系的构建 | 第66-81页 |
| 1 引言 | 第66-67页 |
| 2 材料 | 第67-68页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67-68页 |
| 3 方法 | 第68-74页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因编码区的克隆 | 第68-69页 |
| ·pET-28a(+)—MTH1745原核表达系统的构建 | 第69-71页 |
| ·E.coli BL21(DE3)热耐受性实验 | 第71页 |
| ·E.coli(pSJS1240,pET-28a-MTH1745)过表达系统的构建 | 第71-72页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因表达产物的Ni柱纯化 | 第72-73页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因表达产物的透析复性 | 第73页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第73页 |
| ·HPLC检测蛋白质纯度 | 第73-74页 |
| 4 结果 | 第74-78页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)编码区的克隆和pET-28a(+)-MTH1745原核表达系统的构建 | 第74页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因在大肠杆菌中表达产物的检测 | 第74-75页 |
| ·诱导表达和E.coli BL21(DE3)热耐受性 | 第75-76页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)基因原核表达产物胞内存在形式的鉴定 | 第76-77页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化复性后二硫键异构酶(MTH1745)蛋白质 | 第77页 |
| ·HPLC检测纯化的二硫键异构酶(MTH1745)蛋白质 | 第77-78页 |
| 5 讨论 | 第78-79页 |
| 6 参考文献 | 第79-81页 |
| 第五章 二硫键异构酶(MTH1745)的体外活性检测与分析 | 第81-90页 |
| 1 引言 | 第81-82页 |
| 2 材料 | 第82-83页 |
| ·试验材料 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·主要仪器 | 第82-83页 |
| 3 方法 | 第83-85页 |
| ·还原酶的测定 | 第83页 |
| ·二硫键异构活性的测定 | 第83-84页 |
| ·分子伴侣活性的测定 | 第84-85页 |
| 4 结果 | 第85-86页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)的还原酶活性 | 第85页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)的二硫键异构活性 | 第85-86页 |
| ·二硫键异构酶(MTH1745)的分子伴侣活性 | 第86页 |
| 5 讨论 | 第86-87页 |
| 6 参考文献 | 第87-90页 |
| 第六章 二硫键异构酶(MTH1745)对大肠杆菌DSBA的互补分析 | 第90-106页 |
| 1 引言 | 第90-91页 |
| 2 材料 | 第91页 |
| ·试验材料 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| 3 方法 | 第91-101页 |
| ·构建质粒pFK198 | 第91-95页 |
| ·pFK200的构建 | 第95-100页 |
| ·JCB573,JCB579,JCB280,JCB583的构建 | 第100页 |
| ·碱性磷酸酶(AP)活性的检测 | 第100-101页 |
| 4 结果 | 第101-104页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(MTH1745)基因编码区的克隆 | 第101页 |
| ·pFK198质粒的构建和鉴定 | 第101-102页 |
| ·Apss,MTH1745和Apss-MTH1745的克隆 | 第102-103页 |
| ·pFK200质粒的构建和鉴定 | 第103页 |
| ·AP酶活性检测 | 第103-104页 |
| 5 讨论 | 第104-105页 |
| 6 参考文献 | 第105-106页 |
| 第七章 结论、创新点与展望 | 第106-108页 |
| 1 结论 | 第106-107页 |
| 2 创新点 | 第107页 |
| 3 有待进一步开展的工作 | 第107-108页 |
| 附录 | 第108-116页 |
| 附录一 常用试剂的配置 | 第108-112页 |
| 附录二 本论文所用菌株和质粒一览表 | 第112-113页 |
| 附录三 本论文所用引物一览表 | 第113-114页 |
| 附录四 缩略词表 | 第114-115页 |
| 附录五 攻读研究生期间发表、投稿的论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
