| 中文摘要 | 第1-17页 |
| 英文摘要 | 第17-21页 |
| 符号说明 | 第21-22页 |
| 绪论 | 第22-27页 |
| 1 引言 | 第22-23页 |
| 2 基因载体研究概况 | 第23-24页 |
| 3 课题的设想和思路 | 第24-27页 |
| 第一章 模型基因的选择和制备 | 第27-34页 |
| 一、实验材料 | 第27-29页 |
| 1 试剂与药品 | 第27-28页 |
| 2 主要仪器 | 第28页 |
| 3 常用溶液的配制 | 第28-29页 |
| 4 细菌培养基 | 第29页 |
| 二、实验方法 | 第29-30页 |
| 1 细菌小量培养 | 第29页 |
| 2 细菌大量培养 | 第29页 |
| 3 碱裂解法大量抽提质粒基因 | 第29-30页 |
| 4 质粒基因的酶切鉴定 | 第30页 |
| 5 质粒基因的含量和纯度分析 | 第30页 |
| 三、实验结果 | 第30-31页 |
| 1 酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2 产量和纯度分析 | 第31页 |
| 四、讨论 | 第31-34页 |
| 1 质粒基因(pEGFP-N1)结构 | 第31-32页 |
| 2 大量制备质粒DNA的注意事项 | 第32-33页 |
| 3 基因治疗用质粒DNA的质量评价 | 第33-34页 |
| 第二章 阳离子固体脂质纳米粒/pDNA二元复合物的研究 | 第34-57页 |
| 一、实验材料 | 第34-35页 |
| 1 试剂与药品 | 第34-35页 |
| 2 仪器 | 第35页 |
| 二、实验方法 | 第35-41页 |
| 1 DNA含量测定方法的建立 | 第35-37页 |
| ·SYBR Green Ⅰ工作液配制 | 第35-36页 |
| ·激发、发射波长的选择 | 第36页 |
| ·荧光强度影响因素的考察 | 第36页 |
| ·标准曲线的建立 | 第36页 |
| ·精密度实验 | 第36-37页 |
| ·回收率实验 | 第37页 |
| 2 阳离子固体脂质纳米粒的制备 | 第37页 |
| 3 纳米粒的形态、粒径和表面电位的测定 | 第37页 |
| 4 处方的单因素考察和优化 | 第37-38页 |
| ·单因素考察 | 第37页 |
| ·正交设计实验 | 第37页 |
| ·重现性考察 | 第37-38页 |
| 5 SLN细胞毒性实验 | 第38页 |
| 6 SLNs-pDNA的制备 | 第38-39页 |
| 7 复合物凝胶阻滞分析 | 第39页 |
| ·纳米粒的量对复合物形成的影响 | 第39页 |
| ·CaCl_2浓度对复合物形成的影响 | 第39页 |
| 8 SLNs-pDNA抗核酸酶能力考察 | 第39-40页 |
| ·孵育时间的影响 | 第39-40页 |
| ·酶浓度的影响 | 第40页 |
| 9 SLNs-pDNA体外释放实验 | 第40页 |
| 10 SLNs-pDNA体外转染实验 | 第40-41页 |
| 三、实验结果 | 第41-53页 |
| 1 DNA含量测定方法的考查结果 | 第41-43页 |
| ·激发、发射波长的确定 | 第41页 |
| ·荧光强度影响因素的考察 | 第41-42页 |
| ·标准曲线的建立 | 第42页 |
| ·精密度实验 | 第42-43页 |
| ·回收率实验 | 第43页 |
| 2 处方优化结果 | 第43-47页 |
| ·单因素考查结果 | 第44-45页 |
| ·正交设计实验结果 | 第45-46页 |
| ·重现性考察结果 | 第46-47页 |
| 3 SLN及SLNs-pDNA的形态、粒径的比较 | 第47-48页 |
| 4 SLN细胞毒性实验 | 第48页 |
| 5 复合物凝胶阻滞分析 | 第48-50页 |
| ·纳米粒的用量对复合物形成的影响 | 第48-49页 |
| ·CaCl_2浓度对复合物形成的影响 | 第49-50页 |
| 6 SLNs-pDNA抗核酸酶能力考察 | 第50-51页 |
| ·酶解反应孵育时间的影响 | 第50页 |
| ·酶浓度的影响 | 第50-51页 |
| 7 SLNs-pDNA体外释放实验 | 第51-52页 |
| 8 SLNs-pDNA体外转染实验 | 第52-53页 |
| 四、讨论 | 第53-57页 |
| 第三章 阴离子型载鱼精蛋白-pDNA复合物固体脂质纳米粒的初步研究 | 第57-69页 |
| 一、实验材料 | 第57-58页 |
| 1 试剂与药品 | 第57-58页 |
| 2 主要仪器 | 第58页 |
| 二、实验方法 | 第58-61页 |
| 1 含量测定方法的建立 | 第58-59页 |
| ·去缩合试剂的选择 | 第58页 |
| ·离子强度对荧光强度的影响 | 第58页 |
| ·线性范围 | 第58-59页 |
| ·回收率试验 | 第59页 |
| ·精密度试验 | 第59页 |
| 2 鱼精蛋白-pDNA复合物的制备 | 第59页 |
| 3 复合物凝胶阻滞分析 | 第59页 |
| 4 复合物抗高速剪切能力的考察 | 第59页 |
| 5 PD-SLN制备工艺的选择 | 第59-60页 |
| ·溶剂扩散法 | 第59-60页 |
| ·复乳法 | 第60页 |
| 6 形态、粒径和zeta电位 | 第60页 |
| 7 载基因纳米粒中pDNA的包封率测定 | 第60页 |
| 8 PD-SLN抗核酸酶能力考察 | 第60-61页 |
| 9 PD-SLN体外释放实验 | 第61页 |
| 三、实验结果 | 第61-67页 |
| 1 含量测定方法的建立 | 第61-63页 |
| ·去缩合试剂的选择 | 第61页 |
| ·离子强度对荧光强度的影响 | 第61-62页 |
| ·线性范围 | 第62-63页 |
| ·回收率试验 | 第63页 |
| ·精密度试验 | 第63页 |
| 2 鱼精蛋白-pDNA复合物的制备 | 第63-64页 |
| 3 复合物凝胶阻滞分析 | 第64页 |
| 4 复合物抗高速剪切能力的考察 | 第64-65页 |
| 5 PD-SLN的形态、粒径、zeta电位、含量和包封率 | 第65-66页 |
| 6 PD-SLN抗核酸酶能力考察 | 第66页 |
| 7 PD-SLN体外释放实验 | 第66-67页 |
| 四、讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 阴离子型载pDNA固体脂质三元复合纳米粒的研究 | 第69-87页 |
| 一、实验材料 | 第70-71页 |
| 1 试剂与药品 | 第70页 |
| 2 仪器 | 第70-71页 |
| 二、实验方法 | 第71-73页 |
| 1 鱼精蛋白-DNA二元复合物的制备 | 第71页 |
| 2 空白小粒径固体脂质纳米粒的制备 | 第71页 |
| 3 优化条件验证 | 第71页 |
| 4 三元复合纳米粒的制备 | 第71页 |
| 5 三元纳米复合物的理化性质 | 第71-72页 |
| 6 三元复合物的结合率测定 | 第72页 |
| 7 圆二色谱(CD)研究 | 第72页 |
| 8 三元复合纳米粒抗核酸酶降解的能力 | 第72页 |
| 9 体外释放实验结果 | 第72-73页 |
| 10 细胞成活率考察 | 第73页 |
| 11 基因转染实验 | 第73页 |
| 三、结果和讨论 | 第73-87页 |
| 1 鱼精蛋白-DNA二元复合物的制备 | 第73页 |
| 2 空白小粒径固体脂质纳米粒的制备 | 第73-76页 |
| 3 三元复合纳米粒的制备 | 第76-79页 |
| 4 三元复合物的结合率测定 | 第79-80页 |
| 5 圆二色谱(CD)研究 | 第80-81页 |
| 6 三元复合纳米粒抗核酸酶降解的能力 | 第81-82页 |
| 7 体外释放实验结果 | 第82-84页 |
| 8 细胞成活率考察 | 第84-85页 |
| 9 基因转染实验 | 第85-87页 |
| 总结与展望 | 第87-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第98-99页 |
| 文献综述 | 第99-107页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第107页 |
