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β-甘露聚糖酶基因测序、克隆表达及其工程菌的代谢通量研究

中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-9页
前言第9-10页
第一章 文献综述第10-27页
   ·β-甘露聚糖酶产生菌第10-12页
     ·β-甘露聚糖酶的来源第10-11页
     ·β-甘露聚糖酶产生菌的筛选第11页
     ·β-甘露聚糖酶产生菌的鉴定第11-12页
   ·β-甘露聚糖酶的分子生物学研究第12-21页
     ·β-甘露聚糖酶的克隆与序列特点第12-16页
     ·β-甘露聚糖酶的表达第16-18页
     ·表达载体第18-19页
     ·大肠杆菌表达系统第19-21页
   ·代谢网络及代谢通量分析第21-22页
   ·β-甘露聚糖酶的结构与稳定性第22-23页
   ·β-甘露聚糖酶的应用第23-25页
     ·在饲料添加剂中的应用第23页
     ·在纸浆工业中的应用第23-24页
     ·在食品中的应用第24页
     ·在石油破胶剂中的应用第24页
     ·在其他方面的应用第24-25页
   ·本文主要研究内容第25-27页
第二章 β-甘露聚糖酶生产菌株的鉴定第27-43页
   ·材料第27-29页
     ·菌种与质粒第27页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第27页
     ·培养基第27-28页
     ·主要溶液第28-29页
     ·实验室仪器第29页
   ·实验方法第29-35页
     ·刚果红染色法对菌株的筛选鉴定第29-30页
     ·β-甘露聚糖酶产生菌株的常规鉴定第30页
     ·16S rDNA 系统发育分析第30-35页
   ·结果与讨论第35-42页
     ·刚果红染色快速鉴定第35页
     ·形态与生理生化鉴定第35-37页
     ·16S rDNA 系统发育分析第37-42页
   ·小结第42-43页
第三章 Bacillus subtilis TJ-200603β-甘露聚糖酶的测序、克隆与表达第43-70页
   ·材料第43-45页
     ·菌种与质粒第43页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第43页
     ·主要溶液第43-44页
     ·实验室仪器第44-45页
   ·实验方法第45-56页
     ·β-甘露聚糖酶基因部分序列的分析第45-46页
     ·β-甘露聚糖酶基因全长序列的分析第46-47页
     ·β-甘露聚糖酶成熟肽的基因克隆第47-48页
     ·原核表达载体 pET-22b-man 的构建与转化第48-52页
     ·重组蛋白的诱导表达第52-56页
   ·结果与讨论第56-69页
     ·β-甘露聚糖酶基因部分序列的分析第56-59页
     ·β-甘露聚糖酶基因全长序列的分析第59-64页
     ·β-甘露聚糖酶成熟肽的基因克隆第64-66页
     ·原核表达载体 pET-22b-man 的构建与转化第66-67页
     ·重组蛋白的诱导表达第67-69页
   ·小结第69-70页
第四章 产β-甘露聚糖酶大肠杆菌工程菌的代谢通量分析第70-79页
   ·代谢通量分析原理第70-71页
   ·E.coli 的生化反应网络第71-73页
   ·E.coli 代谢模型的建立第73页
   ·E.coli 代谢模型的优化计算第73页
   ·结果与讨论第73-78页
     ·以β-甘露聚糖酶的生物合成为优化目标的代谢流分析第73-74页
     ·以菌体的生长为优化目标的代谢流分析第74-75页
     ·代谢网络中重要节点的比较分析第75-78页
   ·小结第78-79页
第五章 β-甘露聚糖酶热稳定性的研究第79-88页
   ·材料第79-80页
     ·试剂第79-80页
     ·实验室仪器第80页
   ·实验方法第80-82页
     ·酶活力的测定方法第80页
     ·酶液与保护剂贮液的配制第80页
     ·酶热稳定性的测定第80页
     ·复合保护剂配比的正交设计第80-81页
     ·保护剂存在时β-甘露聚糖酶最适反应温度的测定第81页
     ·β-甘露聚糖酶热失活曲线的测定与失活参数的计算第81-82页
   ·结果与讨论第82-87页
     ·单一保护剂对β-甘露聚糖酶稳定性的影响第82-83页
     ·不同配比的复合保护剂对β-甘露聚糖酶稳定性的影响第83-85页
     ·保护剂存在时β-甘露聚糖酶最适反应温度第85页
     ·65℃下β-甘露聚糖酶失活动力学和热力学及保护机理分析第85-87页
   ·小结第87-88页
第六章 结论与展望第88-91页
   ·结论第88-89页
   ·展望第89-91页
参考文献第91-98页
发表论文和参加科研情况第98-99页
附录第99-104页
致谢第104页

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