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白菜抽薹性相关序列的克隆与分析

摘要第1-6页
Abstract第6-7页
缩略词(Abbreviation)第7-11页
1.绪论第11-30页
   ·高等植物的开花调控第11-16页
     ·植物几种主要的成花途径第12-14页
       ·春化途径第12页
       ·自主开花途径第12-13页
       ·光周期开花途径第13页
       ·赤霉素途径第13-14页
     ·高等植物主要的成花基因第14-16页
   ·春化作用与抽薹开花第16-22页
     ·春化作用的相关基因第16-21页
     ·高等植物中春化途径开花基因的研究现状第21-22页
     ·抽薹性状研究进展第22-23页
     ·大白菜耐先期抽薹育种第22页
     ·晚抽薹遗传研究第22-23页
     ·晚抽薹性分子标记研究第23页
   ·基因克隆的方法第23-26页
     ·根据已知序列克隆基因第23页
     ·根据已知探针克隆基因第23-24页
     ·未知序列的基因打靶第24-26页
       ·随机引物法克隆未知序列基因第24页
       ·mRNA差别显示(mRNA differential display,DD)第24页
       ·代表性差示分析(represential display analysis,RDA)第24-25页
       ·抑制性扣除杂(suppression subtractive hybridization,SSH)第25页
       ·cDNA-AFLP技术第25-26页
     ·用特异抗体克隆基因第26页
     ·特异基因的功能克隆第26页
     ·实时荧光定量PCR第26-29页
     ·实时荧光定量PCR原理第26-27页
       ·反应原理第26-27页
       ·定量原理第27页
       ·定量方法第27页
     ·实时荧光定量PCR的应用第27-29页
       ·基因表达的定量第28页
       ·等位基因的鉴定第28页
       ·单核苷酸多态性(SNP)及突变分析第28-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
2 材料和方法第30-46页
   ·实验材料及处理第30页
   ·实验方法第30-42页
     ·RNA的提取第30-32页
       ·器皿的处理第30页
       ·试剂第30-31页
       ·仪器第31页
       ·RNA提取的步骤第31页
       ·RNA的检测第31页
       ·RNA纯化第31-32页
     ·cDNA的合成第32-34页
       ·1st strand cDNA合成反应第32页
       ·2nd strand cDNA合成反应以及末端平滑化第32-33页
       ·合成的cDNA精制第33页
       ·合成的cDNA检测第33-34页
     ·cDNA-AFLP分析与抽薹性相关的序列第34-38页
       ·cDNA酶切及接头连接第35页
       ·预扩增第35-36页
       ·选择性扩增第36-37页
       ·聚丙烯酰胺胶的制备第37页
       ·测序胶电泳第37页
       ·银染第37-38页
     ·与抽薹相关的cDNA-AFLP目标片段的获得第38-42页
       ·差异条带的统计第38页
       ·差异条带的回收及重扩增第38页
       ·目的片段的琼脂糖凝胶回收纯化第38-39页
       ·目的片段与载体的连接第39-40页
       ·目标片段的转化第40-42页
   ·RT-PCR检测第42-44页
     ·合成cDNA一链第42-43页
     ·RT-PCR检测第43-44页
   ·荧光定量PCR第44-46页
     ·本实验采用takara公司的SYBR Premix Ex Tag~(TM)第44-45页
     ·实时荧光定量PCR反应条件第45页
     ·结果处理第45-46页
3 结果与分析第46-59页
   ·低温春化结果第46页
   ·cDNA-AFLP多态性分析第46-47页
   ·差异条带功能分类第47-52页
   ·差异片段的半定量RT-PCR检测第52-53页
   ·差异片段的荧光定量PCR分析第53-59页
4.讨论第59-64页
   ·荧光定量分析结果第59-62页
     ·低温诱导下均上调表达的基因第59-60页
     ·在两材料中表达模式不同的基因第60-61页
     ·低温诱导下表达呈现上调-下调-再上调表达趋势的序列第61-62页
   ·低温诱导过程中发现的其它EST第62-64页
     ·低温诱导过程中的基因表达调控第62页
     ·低温诱导与信号转导第62-63页
     ·低温诱导与胁迫应答第63-64页
5 结论第64-65页
参考文献第65-70页
致谢第70页

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