| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-28页 |
| ·试验材料 | 第13-15页 |
| ·菌株和质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·供试培养基及试剂配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·PKA 抑制剂对玉米大斑病菌孢子萌发和附着胞形成的影响 | 第15页 |
| ·试验方法 | 第15页 |
| ·检测方法 | 第15页 |
| ·玉米大斑病菌PKA 基因的克隆 | 第15-20页 |
| ·引物设计 | 第15页 |
| ·病菌基因组DNA 及总RNA 提取 | 第15-17页 |
| ·反转录体系及第一链cDNA 的合成 | 第17页 |
| ·病菌PKA 基因DNA 同源片段的获得 | 第17-18页 |
| ·DNA 片段的纯化 | 第18页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第19页 |
| ·PCR 验证阳性克隆 | 第19页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第19-20页 |
| ·质粒样本测序与同源性分析 | 第20页 |
| ·基因侧翼序列的获得 | 第20-22页 |
| ·模板DNA 的制备和引物的设计 | 第20-21页 |
| ·Genome Walking PCR 扩增 | 第21页 |
| ·PKA-R 基因全长序列的扩增 | 第21-22页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第22-23页 |
| ·探针制备 | 第22页 |
| ·酶切 | 第22页 |
| ·电转移 | 第22-23页 |
| ·Southern Blotting | 第23页 |
| ·免疫检测 | 第23页 |
| ·PKA-R 基因的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·PKA-R 基因同源重组载体的构建 | 第24-25页 |
| ·PKA-C 基因 RNAi 突变体的获得 | 第25-28页 |
| ·PKA-C 基因RNAi 载体的构建 | 第25-26页 |
| ·PKA-C 基因RNAi 重组载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第26-27页 |
| ·转化子验证及分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-49页 |
| ·玉米大斑病菌 cAMP 依赖性蛋白激酶 A 基因的抑制剂分析 | 第28-29页 |
| ·基因组 DNA 和总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第29页 |
| ·PKA-R 基因的获得 | 第29-33页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 基因DNA 同源片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·PKA-R 基因全长的获得 | 第30-32页 |
| ·PKA-R 基因cDNA 序列的获得 | 第32-33页 |
| ·PKA-C 基因的获得 | 第33-37页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-C 基因DNA 同源片段的扩增 | 第33-35页 |
| ·Genome Walking 对PKA-C 基因已知片段侧翼序列的扩增 | 第35-37页 |
| ·PKA 基因拷贝数分析 | 第37-38页 |
| ·PKA 基因探针的制备 | 第37页 |
| ·Southern 杂交试验 | 第37-38页 |
| ·PKA-C 基因的同源性分析 | 第38-39页 |
| ·PKA-R 基因的生物信息学分析 | 第39-43页 |
| ·PKA-R 基因同源性和进化树分析 | 第39-40页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 蛋白保守结构域与基序分析 | 第40页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 蛋白的亚细胞定位、信号肽和跨膜结构分析 | 第40-41页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 基因编码氨基酸序列疏水性/亲水性分析 | 第41页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 蛋白的二级结构预测与分析 | 第41-42页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 蛋白的三级结构预测与分析 | 第42-43页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-R 蛋白固有无序化特征分析 | 第43页 |
| ·PKA-R 基因同源重组载体的构建 | 第43-46页 |
| ·PKA-C 基因的RNA 干扰 | 第46-49页 |
| ·PKA-C 基因的RNA 干扰载体的构建 | 第46-47页 |
| ·PKA-C 基因RNA 干扰载体转化 | 第47页 |
| ·PKA-C 基因RNA 干扰转化子的筛选 | 第47-48页 |
| ·PKA-C 基因突变体的性状观察 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·利用保守性核苷酸序列进行同源基因克隆 | 第49页 |
| ·Genome Walking 技术获得已知基因片段的侧翼序列 | 第49-50页 |
| ·PKA-R 的生物信息学分析 | 第50页 |
| ·PKA 突变体的研究 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
