| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| ·定点突变技术 | 第10-12页 |
| ·体外诱变技术研究进展 | 第10页 |
| ·依赖PCR 的体外诱变 | 第10-11页 |
| ·体外诱变的应用 | 第11-12页 |
| ·植酸酶研究进展 | 第12-16页 |
| ·植酸酶的来源及分类 | 第12页 |
| ·真菌来源的植酸酶 | 第12页 |
| ·细菌来源的植酸酶 | 第12-13页 |
| ·植物来源的植酸酶 | 第13页 |
| ·植酸酶的作用及应用 | 第13-14页 |
| ·植酸酶基因 | 第14页 |
| ·植酸酶晶体结构的研究 | 第14-15页 |
| ·植酸酶的基因工程进展 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 2 改进的大引物突变方法的建立 | 第17-24页 |
| ·试验材料 | 第17-18页 |
| ·试验菌株、质粒 | 第17页 |
| ·主要仪器和设备 | 第17页 |
| ·酶及生化试剂 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·试剂与缓冲液 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-19页 |
| ·提取质粒 | 第18-19页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第19页 |
| ·突变引物浓度和循环数的确立 | 第19页 |
| ·突变效率的分析 | 第19页 |
| ·标准大引物发扩增目的基因 | 第19页 |
| ·结果与分析 | 第19-22页 |
| ·突变引物浓度对扩增结果的影响 | 第20页 |
| ·循环数对扩增结果的影响 | 第20-21页 |
| ·突变效率分析 | 第21页 |
| ·突变方法的确立 | 第21-22页 |
| ·标准大引物方法与改进后的大引物方法比较 | 第22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 3 植酸酶的定点突变 | 第24-39页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·试验菌株、质粒 | 第24页 |
| ·酶及生化试剂 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂与缓冲液 | 第25页 |
| ·贮备液 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·突变引物的设计 | 第25-26页 |
| ·突变基因的获得及克隆载体的构建 | 第26-27页 |
| ·阳性质粒的提取及酶切鉴定 | 第27页 |
| ·克隆片段的DNA 序列测定 | 第27-28页 |
| ·突变植酸酶基因表达载体的构建 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第28页 |
| ·毕赤酵母细胞的转化 | 第28-29页 |
| ·重组转化子植酸酶酶活性的平板检测 | 第29页 |
| ·重组子的PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| ·植酸酶基因在毕赤酵母GS115 中的诱导表达 | 第30页 |
| ·表达产物-植酸酶的酶活力测定 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备及发酵上清液的蛋白质电泳 | 第31页 |
| ·植酸酶基因工程菌遗传稳定性检测 | 第31页 |
| ·突变植酸酶与GA-22 植酸酶的最适pH 测定与对比 | 第31页 |
| ·突变植酸酶与GA-22 植酸酶的热稳定性测定与对比 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-37页 |
| ·突变植酸酶基因K281E、K281EQ278L 的获得 | 第32页 |
| ·突变氨基酸序列对比分析 | 第32-33页 |
| ·突变植酸酶基因分泌型重组酵母表达载体的构建和鉴定 | 第33页 |
| ·质粒pPIC9K/phyA-K281E，pPIC9K/phyA-K281EQ278L 电击转化 | 第33-34页 |
| ·酵母转化子的植酸钙平板筛选 | 第34页 |
| ·酵母转化子的高酶活的筛选 | 第34页 |
| ·突变表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第34-35页 |
| ·酵母转化子的PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组植酸酶GA-22，EE-1，EE-2 的最适反应pH 值测定与比较 | 第36页 |
| ·重组植酸酶GA-22，EE-1，EE-2 的热稳定性测定与比较 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·突变植酸酶的酶学性质 | 第37页 |
| ·下一步工作设想 | 第37-39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 5 参考文献 | 第40-44页 |
| 在校期间发表学术论文 | 第44-45页 |
| 作者简历 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
