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紫茎泽兰F3H基因表达载体的构建及对烟草转化的研究

致谢第1-7页
摘要第7-8页
缩略词表第8-9页
1 文献综述第9-16页
   ·紫茎泽兰的生物学特性第9页
   ·紫茎泽兰的分布第9-10页
     ·紫茎泽兰在世界的分布范围第9-10页
     ·紫茎泽兰在中国的分布范围第10页
   ·紫茎泽兰的危害第10-11页
   ·紫茎泽兰的研究进展第11页
   ·类黄酮3'-羟化酶(F3'H)第11-14页
     ·F3'H 基因的分离及细胞定位第11-12页
     ·F3'H 基因的表达特性第12页
     ·F3'H 基因的代谢途径及功能第12-14页
   ·生理指标的选择第14-15页
     ·过氧化物酶(POD)第14-15页
     ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)第15页
   ·RNA 干扰第15-16页
     ·RNA 干扰的发现及定义第16页
     ·RNA 干扰技术的应用第16页
2 引言第16-19页
   ·研究目的、意义及内容第16-18页
   ·本研究的技术路线第18-19页
     ·植物过表达载体121-F3'H 的构建及对烟草的转化第18页
     ·RNA 干扰载体的构建第18-19页
3 材料和方法第19-36页
   ·试验材料第19-20页
     ·基因及转基因植物材料第19页
     ·引物和测序第19页
     ·试验菌株和载体第19-20页
     ·主要试剂及耗材第20页
     ·仪器设备第20页
   ·试验方法第20-36页
     ·常用分子生物学试验方法第20-27页
     ·转基因烟草的鉴定方法第27-28页
     ·转基因烟草的生理检测方法第28页
     ·植物过表达载体的构建与酶切鉴定第28-30页
     ·RNA 干扰载体的构建及鉴定第30-36页
4 结果与分析第36-46页
   ·植物过表达载体的构建第36-39页
     ·F3'H 基因和PBI121 载体片段的获得第36-38页
     ·F3'H 基因和PBI121 载体片段的连接、转化第38页
     ·F3'H 基因片段插入方向的鉴定第38-39页
   ·烟草的遗传转化及PCR 鉴定第39-40页
   ·转基因烟草与非转基因烟草的花色比较第40页
   ·F3'H 基因在转基因烟草中的表达第40-41页
     ·半定量RT-PCR 检测第40-41页
     ·Real-time PCR 检测第41页
   ·转基因烟草生理指标的检测第41-43页
     ·过氧化物酶(POD)活性的检测第41-42页
     ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的检测第42-43页
   ·RNA 干扰载体的构建第43-46页
     ·核心片段的获得第43页
     ·酶切鉴定插入方向第43-44页
     ·PCR第44-45页
     ·Pst I 酶切鉴定重组质粒BP-F3'H第45-46页
     ·PCR 鉴定重组质粒LR- F3'H第46页
5 结论第46-47页
   ·构建紫茎泽兰F3'H 基因正向植物过量表达载体第46页
   ·转基因烟草的PCR 检测第46页
   ·转基因烟草花色观察第46-47页
   ·转基因烟草POD 和PAL 的活性变化第47页
   ·RNA 干扰载体的构建与烟草转化第47页
6 讨论第47-49页
   ·转基因烟草POD 和PAL 活性变化第47-48页
   ·转基因烟草花色变浅分析第48-49页
参考文献第49-55页
Abstract第55-57页
附录一:植物表达载体PBI121第57页
附录二:紫茎泽兰F3'H 基因片段(含Xba I 位点)第57-58页

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