| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-31页 |
| 1 γ-氨基丁酸概述 | 第16-17页 |
| ·γ-氨基丁酸的结构性质 | 第16页 |
| ·γ-氨基丁酸的自然分布 | 第16-17页 |
| 2 γ-氨基丁酸的生理功能 | 第17-20页 |
| ·降血压功能 | 第17-18页 |
| ·促进分泌生长激素功能 | 第18页 |
| ·抗衰老功能 | 第18-19页 |
| ·促进生殖功能 | 第19页 |
| ·抗焦虑的功能 | 第19页 |
| ·调节胃酸分泌功能 | 第19-20页 |
| ·其他功能 | 第20页 |
| 3 γ-氨基丁酸的合成与分解代谢 | 第20-21页 |
| ·γ-氨基丁酸代谢途径 | 第20-21页 |
| ·生物体内γ-氨基丁酸代谢 | 第21页 |
| 4 γ-氨基丁酸的制备 | 第21-24页 |
| ·化学合成法 | 第21-22页 |
| ·植物组织代谢生物学途径 | 第22页 |
| ·微生物发酵生产γ-氨基丁酸的研究 | 第22-24页 |
| 5 γ-氨基丁酸的开发应用 | 第24-26页 |
| ·发芽糙米 | 第25页 |
| ·γ-氨基丁酸茶 | 第25页 |
| ·其它食品源γ-氨基丁酸 | 第25-26页 |
| 6 谷氨酸脱羧酶的研究进展 | 第26-28页 |
| ·谷氨酸脱羧酶的分离纯化及其理化性质 | 第26-27页 |
| ·谷氨酸脱羧酶的活性调节 | 第27页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第27页 |
| ·谷氨酸脱羧酶的应用 | 第27-28页 |
| 7 研究背景 | 第28-29页 |
| 8 研究的目的及意义 | 第29-31页 |
| ·研究目的 | 第29-30页 |
| ·技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 高产γ-氨基丁酸酵母菌菌株的筛选 | 第31-40页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·菌株来源 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·主要实验试剂 | 第32页 |
| ·主要实验设备 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-34页 |
| ·酵母菌菌株的分离 | 第33页 |
| ·菌种活化传代和发酵种子培养 | 第33页 |
| ·液体发酵培养和产GABA菌株初筛 | 第33页 |
| ·发酵液中GABA含量的测定 | 第33页 |
| ·发酵条件优化 | 第33页 |
| ·酵母菌菌株的鉴定 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-39页 |
| ·酵母菌菌株的分离与纯化 | 第34页 |
| ·产GABA酵母菌菌株的初筛 | 第34-35页 |
| ·产GABA酵母菌菌株的复筛 | 第35页 |
| ·培养基和发酵条件优化单因素轮换试验 | 第35-38页 |
| ·MJ2菌株的鉴定 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 高产γ-氨基丁酸酵母菌GAD的克隆 | 第40-64页 |
| 1 材料 | 第40-43页 |
| ·菌株来源 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要实验设备 | 第42页 |
| ·常用生物信息分析相关软件及网站 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-50页 |
| ·酵母菌基因组DNA的提取 | 第43-45页 |
| ·酵母菌GAD的克隆 | 第45-50页 |
| ·酵母菌GAD的序列分析 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-62页 |
| ·MJ2酵母菌基因组DNA提取结果 | 第50-52页 |
| ·酵母菌GAD的扩增结果 | 第52-53页 |
| ·酵母菌GAD的克隆鉴定结果 | 第53-55页 |
| ·酵母菌GAD的序列分析 | 第55-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 高产γ-氨基丁酸酵母菌GAD的原核表达 | 第64-83页 |
| 1 材料 | 第64-66页 |
| ·菌株来源 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要实验设备 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-75页 |
| ·外源插入DNA片段的制备 | 第66-67页 |
| ·pET30a(+)表达载体的制备 | 第67-69页 |
| ·酵母菌GAD原核表达载体的构建 | 第69-71页 |
| ·酵母菌GAD原核表达基因工程宿主菌的构建 | 第71-73页 |
| ·酵母菌GAD的原核表达 | 第73-74页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-80页 |
| ·目的基因片段DNA的制备结果 | 第75-77页 |
| ·pET30a载体的制备结果 | 第77页 |
| ·重组表达质粒pET30gad转化子PCR克隆鉴定结果 | 第77-79页 |
| ·酵母菌GAD原核表达结果 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-83页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第80-81页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第81页 |
| ·目的基因的表达 | 第81-82页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第82-83页 |
| 第五章 高产γ-氨基丁酸酵母菌GAAD的真核表达 | 第83-102页 |
| 1 材料 | 第84-85页 |
| ·菌株来源 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| ·主要实验设备 | 第85页 |
| 2 方法 | 第85-94页 |
| ·外源插入DNA片段的制备 | 第85-86页 |
| ·pPIC9K巴斯德毕赤酵母表达载体的制备 | 第86-87页 |
| ·巴斯德毕赤酵母真核表达载体的构建 | 第87页 |
| ·酵母菌GAD真核表达载体原核宿主菌的构建 | 第87-89页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的构建 | 第89-93页 |
| ·酵母菌GAD的真核表达 | 第93-94页 |
| 3 结果 | 第94-99页 |
| ·pMDI9GAD重组质粒DNA提取及双酶切结果 | 第94页 |
| ·pPIC9K载体的制备结果 | 第94-95页 |
| ·重组表达质粒pPIC9Kgad转化子PCR鉴定结果 | 第95-96页 |
| ·环状重组表达质粒pPIC9Kgad线性化及脱磷酸化处理结果 | 第96-97页 |
| ·Pichia pastoris GS115酵母转化子的鉴定结果 | 第97-98页 |
| ·酵母菌GAD真核表达结果 | 第98-99页 |
| 4 讨论 | 第99-102页 |
| ·真核表达系统的选择 | 第99-100页 |
| ·真核表达系统的构建 | 第100页 |
| ·目的基因的表达 | 第100-102页 |
| 第六章 结论 | 第102-104页 |
| 1 高产γ-氨基丁酸酵母菌菌株的筛选 | 第102页 |
| 2 高产γ-氨基丁酸酵母菌GAD的克隆 | 第102页 |
| 3 酵母菌GAD的原核表达 | 第102-103页 |
| 4 酵母菌GAD的真核表达 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 附录1 pMD19-T Simple Vector的物理图谱 | 第117-118页 |
| 附录2 pET-30a(+)Vector的物理图谱 | 第118-119页 |
| 附录3 pPIC9K Vector的物理图谱 | 第119-120页 |
| 附录4 酵母菌GAD与已报道的GAD序列相似性比较 | 第120-121页 |
| 附录5 酵母菌GAD氨基酸序列与已报道序列相似性比较 | 第121-125页 |
| 附录6 酵母菌GAD与部分真核GAD序列相似性比较结果 | 第125-132页 |
| 附录7 酵母菌GAD氨基酸序列与部分真核GAD比较结果 | 第132-136页 |
| 附录8 巴斯德毕赤酵母表达系统常用试剂及培养基 | 第136-141页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
