| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写 | 第9-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 胚胎干细胞的生物学特性 | 第18-19页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的形态学特征 | 第18页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞的生物学特性 | 第18-19页 |
| 1.2 胚胎干细胞的建系 | 第19页 |
| 1.3 人胚胎干细胞的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 小鼠胚胎干细胞的研究进展 | 第20页 |
| 1.5 胚胎干细胞的定向诱导分化 | 第20-21页 |
| 1.5.1 胚胎干细胞定向分化成神经细胞 | 第20-21页 |
| 1.5.2 胚胎干细胞定向分化成造血干细胞 | 第21页 |
| 1.5.3 胚胎干细胞定向分化成内皮细胞 | 第21页 |
| 1.5.4 胚胎干细胞定向分化成肝脏细胞 | 第21页 |
| 1.6 肝细胞定向诱导分化过程中关键基因 | 第21-22页 |
| 1.7 肝脏 | 第22-28页 |
| 1.7.1 肝脏的代谢功能 | 第23页 |
| 1.7.2 肝细胞再生过程及调控 | 第23-24页 |
| 1.7.3 胚胎中肝脏早期发育的分子机制 | 第24-25页 |
| 1.7.4 胚胎干细胞向肝细胞的体外诱导分化 | 第25页 |
| 1.7.5 酒精肝的形成机理 | 第25-26页 |
| 1.7.6 乙醇和乙醛的毒性作用 | 第26-28页 |
| 第2章 人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化鉴定 | 第28-57页 |
| 2.1 主要试剂与试剂盒 | 第28-29页 |
| 2.2 主要实验仪器和设备 | 第29页 |
| 2.3 实验步骤 | 第29-35页 |
| 2.3.1 复苏细胞 | 第29-30页 |
| 2.3.2 hESCs细胞传代 | 第30页 |
| 2.3.3 hESCs细胞诱导 | 第30-31页 |
| 2.3.4 细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.5 普通逆转录反应 | 第31-32页 |
| 2.3.6 PCRArray逆转录反应 | 第32-33页 |
| 2.3.7 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 2.3.8 PCR芯片 | 第34-35页 |
| 2.3.9 细胞免疫荧光染色 | 第35页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第35-37页 |
| 2.5 实验结果 | 第37-54页 |
| 2.5.1 人胚胎干细胞向内胚层细胞诱导分化 | 第37-39页 |
| 2.5.2 内胚层细胞向肝细胞诱导分化 | 第39-42页 |
| 2.5.3 人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化程度与人正常肝细胞比较 | 第42-54页 |
| 2.6 小结 | 第54-55页 |
| 2.7 讨论 | 第55-57页 |
| 第3章 酒精抑制人胚胎肝细胞向肝细胞分化 | 第57-85页 |
| 3.1 主要试剂与试剂盒 | 第57-58页 |
| 3.2 主要实验仪器和设备 | 第58页 |
| 3.3 实验步骤 | 第58-61页 |
| 3.3.1 复苏细胞 | 第58-59页 |
| 3.3.2 hESCs细胞传代 | 第59页 |
| 3.3.3 hESCs细胞诱导 | 第59页 |
| 3.3.4 细胞总RNA的提取 | 第59页 |
| 3.3.5 普通逆转录反应 | 第59页 |
| 3.3.6 荧光定量PCR | 第59页 |
| 3.3.7 细胞总蛋白提取 | 第59页 |
| 3.3.8 BCA法测定提取蛋白浓度 | 第59-60页 |
| 3.3.9 蛋白质印迹法(WesternBlot) | 第60-61页 |
| 3.4 主要试剂的配制 | 第61-64页 |
| 3.5 实验结果 | 第64-81页 |
| 3.5.1 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化整个过程中影响 | 第64-70页 |
| 3.5.2 人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化整个过程中肝脏代谢酶相对表达水平 | 第70页 |
| 3.5.3 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中影响 | 第70-72页 |
| 3.5.4 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中肝脏细胞色素酶(CYP2E1)的影响 | 第72-73页 |
| 3.5.5 PCRArray检测酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中影响的主要信号通路 | 第73-79页 |
| 3.5.6 酒精对分化过程中ERK(细胞外调节蛋白激酶)的影响 | 第79-80页 |
| 3.5.7 酒精对诱导分化过程中细胞类型的影响 | 第80-81页 |
| 3.6 小结 | 第81-82页 |
| 3.7 讨论 | 第82-85页 |
| 第4章 酒精通过抑制ERK信号通路抑制肝细胞分化 | 第85-101页 |
| 4.1 主要试剂与试剂盒 | 第85-86页 |
| 4.2 主要实验仪器和设备 | 第86页 |
| 4.3 实验步骤 | 第86-88页 |
| 4.3.1 复苏细胞 | 第86-87页 |
| 4.3.2 hESCs细胞传代 | 第87页 |
| 4.3.3 hESCs细胞诱导 | 第87页 |
| 4.3.4 细胞总RNA的提取 | 第87页 |
| 4.3.5 普通逆转录反应 | 第87页 |
| 4.3.6 荧光定量PCR | 第87页 |
| 4.3.7 细胞总蛋白提取 | 第87页 |
| 4.3.8 细胞核蛋白提取 | 第87-88页 |
| 4.3.9 BCA法测定提取蛋白浓度 | 第88页 |
| 4.4 主要试剂的配制 | 第88-90页 |
| 4.5 实验结果 | 第90-99页 |
| 4.5.1 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中一些基因的影响 | 第90-93页 |
| 4.5.2 ERK信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用 | 第93-99页 |
| 4.6 小结 | 第99-100页 |
| 4.7 讨论 | 第100-101页 |
| 第5章 酒精抑制肝细胞分化的相关信号通路 | 第101-118页 |
| 5.1 主要试剂与试剂盒 | 第101-102页 |
| 5.2 主要实验仪器和设备 | 第102页 |
| 5.3 实验步骤 | 第102-103页 |
| 5.3.1 复苏细胞 | 第102页 |
| 5.3.2 hESCs细胞传代 | 第102-103页 |
| 5.3.3 hESCs细胞诱导 | 第103页 |
| 5.3.4 细胞总RNA的提取 | 第103页 |
| 5.3.5 普通逆转录反应 | 第103页 |
| 5.3.6 荧光定量PCR | 第103页 |
| 5.3.7 细胞总蛋白提取 | 第103页 |
| 5.3.8 细胞核蛋白提取 | 第103页 |
| 5.3.9 BCA法测定提取蛋白浓度 | 第103页 |
| 5.4 主要试剂的配制 | 第103-106页 |
| 5.5 实验结果 | 第106-115页 |
| 5.5.1 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中Notch信号通路的影响 | 第106-107页 |
| 5.5.2 Notch信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用 | 第107-110页 |
| 5.5.3 酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中Wnt信号通路的影响 | 第110-111页 |
| 5.5.4 Wnt经典信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用 | 第111-114页 |
| 5.5.5 Wnt经典信号通路对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中Notch信号通路的影响 | 第114-115页 |
| 5.6 小结 | 第115-116页 |
| 5.7 讨论 | 第116-118页 |
| 总结 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 附录A 攻读学位期间发表的论文目录 | 第132页 |
