| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 基因编辑技术研究进展 | 第11-18页 |
| 1.1.1 归巢核酸酶技术 | 第12-13页 |
| 1.1.2 锌指核酸酶技术 | 第13-14页 |
| 1.1.3 类转录激活效应因子核酸酶技术 | 第14-15页 |
| 1.1.4 CRISPR/Cas9技术 | 第15-17页 |
| 1.1.5 基因组编辑技术创制突变类型 | 第17-18页 |
| 1.2 miRNA作用机制 | 第18-20页 |
| 1.2.1 AtMIR169a简介 | 第19-20页 |
| 2 引言 | 第20-21页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第20页 |
| 2.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 材料背景 | 第21页 |
| 3.1.2 菌种与载体 | 第21页 |
| 3.1.3 试剂 | 第21页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第21-22页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9识别靶位点分析 | 第22页 |
| 3.2.1 基因删除系统靶位点选择 | 第22页 |
| 3.3 AtMIR169a和AtMIR827a基因删除 | 第22-27页 |
| 3.3.1 基因删除载体构建 | 第22-23页 |
| 3.3.2 质粒转化农杆菌 | 第23-24页 |
| 3.3.3 拟南芥的种植与遗传转化 | 第24页 |
| 3.3.4 转基因植株基因组提取 | 第24页 |
| 3.3.5 删除突变体筛选及其遗传鉴定 | 第24-25页 |
| 3.3.6 mir169a删除纯合突变体Northernblot实验 | 第25-26页 |
| 3.3.7 mir169a删除纯合突变体干旱胁迫处理与表型鉴定 | 第26-27页 |
| 3.4 AtTFL1基因特定区域替换 | 第27-29页 |
| 3.4.1 基因替换系统删除载体构建 | 第27页 |
| 3.4.2 基因替换系统修复模板载体构建 | 第27-28页 |
| 3.4.3 载体共转农杆菌 | 第28页 |
| 3.4.4 基因替换突变体筛选与鉴定 | 第28页 |
| 3.4.5 基因替换突变体eGFP表达鉴定 | 第28-29页 |
| 4 结果分析 | 第29-38页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9识别靶位点分析 | 第29-31页 |
| 4.2 AtMIR169a和AtMIR827a基因删除体系建立与验证 | 第31-34页 |
| 4.2.1 AtMIR169a和AtMIR827a基因删除效率与稳定遗传分析 | 第31-32页 |
| 4.2.2 AtMIR169a和AtMIR827a基因删除突变体基因型分析 | 第32-33页 |
| 4.2.3 mir169a纯合删除突变体Northernblot分析 | 第33-34页 |
| 4.2.4 mir169a纯合删除突变体受干旱胁迫处理及表型鉴定 | 第34页 |
| 4.3 AtTFL1基因特定区域替换系统的建立与验证 | 第34-38页 |
| 4.3.1 基因替换突变体的检测 | 第35-36页 |
| 4.3.2 基因替换突变体的筛选 | 第36-37页 |
| 4.3.3 基因替换突变体eGFP表达鉴定 | 第37-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 5.1 基因编辑技术在作物育种中的意义 | 第38页 |
| 5.2 基于双sgRNA向导的CRISPR/Cas9系统的基因删除体系对于植物miRNA研究的意义 | 第38页 |
| 5.3 基于同源重组修复策略的基因替换体系对于基因工程发展的意义 | 第38-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 作者简介 | 第50-51页 |
| 硕士期间发表的研究成果 | 第51页 |
