| 个人简历 | 第3-7页 |
| 英文缩略语表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 技术路线 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一部分 MAGE-D4 在非小细胞肺癌的表达及临床意义 | 第20-32页 |
| 1 实验材料与仪器设备 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.1 癌基因芯片数据库分析 | 第22页 |
| 2.2 免疫组织化学法检测 | 第22-25页 |
| 2.3 统计学分析 | 第25页 |
| 3 实验结果 | 第25-29页 |
| 3.1 Oncomine肺癌数据集MAGE-D4 mRNA分析结果 | 第25-26页 |
| 3.2 非小细胞肺癌中MAGE-D4 的表达 | 第26页 |
| 3.3 MAGE-D4 蛋白与患者临床病理参数关系的分析 | 第26-29页 |
| 4 讨论 | 第29-32页 |
| 第二部分 非小细胞肺癌血清MAGE-D4 抗体的检测 | 第32-44页 |
| 1 实验材料与仪器设备 | 第32-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-37页 |
| 2.1 MAGE-D4 包被蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.2 最适抗原包被浓度与血清稀释度的确定 | 第35页 |
| 2.3 间接ELISA法检测血清中的MAGE-D4 抗体 | 第35-36页 |
| 2.4重复性实验 | 第36页 |
| 2.5 阳性血清的判定 | 第36-37页 |
| 2.6 统计学分析 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.1 包被蛋白的浓度测定 | 第37页 |
| 3.2 非小细胞肺癌血清MAGE-D4 抗体的检测及意义 | 第37-40页 |
| 3.3 肺癌中MAGE-D4 表达与血清抗体出现的关系 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-44页 |
| 第三部分 MAGE-D4 稳定沉默肺癌细胞株的构建 | 第44-73页 |
| 1 实验材料与仪器设备 | 第44-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-64页 |
| 2.1 清洗与消毒 | 第51-52页 |
| 2.2 细胞培养 | 第52-54页 |
| 2.3 目标细胞的筛选 | 第54-58页 |
| 2.4 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定 | 第58页 |
| 2.5 慢病毒用量的确定 | 第58-59页 |
| 2.6 基因沉默细胞株的构建 | 第59-60页 |
| 2.7 RT-qPCR检测MAGE-D4 mRNA的沉默效率 | 第60-61页 |
| 2.8 WB检测MAGE-D4蛋白的沉默效率 | 第61-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-70页 |
| 3.1 目标细胞的筛选 | 第64页 |
| 3.2 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定 | 第64页 |
| 3.3 慢病毒用量的确定 | 第64-67页 |
| 3.4 MAGE-D4 稳定沉默肺癌细胞株的筛选 | 第67页 |
| 3.5 MAGE-D4 沉默效率的检测 | 第67-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 第四部分 MAGE-D4/pEGFP-C1 真核表达载体的构建 | 第73-88页 |
| 1 实验材料与仪器设备 | 第73-76页 |
| 2 实验方法 | 第76-82页 |
| 2.1 引物设计及PCR扩增 | 第76页 |
| 2.2 胶回收PCR产物 | 第76-77页 |
| 2.3 双酶切MAGE-D4基因片段 | 第77-78页 |
| 2.4 质粒扩增与提取 | 第78-79页 |
| 2.5 双酶切质粒 | 第79页 |
| 2.6 MAGE-D4 与载体的连接 | 第79页 |
| 2.7 转化 | 第79-80页 |
| 2.8 重组质粒的筛选及鉴定 | 第80页 |
| 2.9 提取MAGE-D4/pEGFP-C1 重组质粒 | 第80-81页 |
| 2.10 细胞培养 | 第81页 |
| 2.11 MAGE-D4/pEGFP-C1 重组质粒转染A549 细胞 | 第81-82页 |
| 3 实验结果 | 第82-85页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第82页 |
| 3.2 MAGE-D4 重组质粒的鉴定 | 第82页 |
| 3.3 重组质粒转染A549 细胞 | 第82-85页 |
| 4 讨论 | 第85-88页 |
| 全文小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 综述 黑素瘤相关抗原与肺癌的关系 | 第95-113页 |
| 参考文献 | 第105-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第114页 |
