| 英文缩略词 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 1. 材料与方法 | 第13-59页 |
| 1.1 实验试剂 | 第13-14页 |
| 1.2 主要仪器 | 第14-16页 |
| 1.3 主要试剂及培养基配制方法 | 第16-18页 |
| 1.3.1 主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.3.2 主要培养基 | 第17-18页 |
| 1.4 实验方法 | 第18-58页 |
| 1.4.1 CEA动脉粥样硬化斑块和IMA的免疫组织化学染色 | 第18-20页 |
| 1.4.2 逆转录real-time PCR | 第20-22页 |
| 1.4.3 Western blotting检测 | 第22-25页 |
| 1.4.4 小鼠胸主动脉平滑肌原代细胞(VSMC)培养方法 | 第25-27页 |
| 1.4.5 shRNA构建 | 第27-35页 |
| 1.4.6 慢病毒包装 | 第35-36页 |
| 1.4.7 慢病毒感染VSMC | 第36-39页 |
| 1.4.8 细胞总蛋白western blotting检测 | 第39-41页 |
| 1.4.9 迁移实验 | 第41-42页 |
| 1.4.10 Cell Counting Kit-8细胞增殖实验 | 第42页 |
| 1.4.11 转录组测序(RNA-seq) | 第42-45页 |
| 1.4.12 放线菌素Act-D半衰期实验 | 第45-46页 |
| 1.4.13 染色质免疫共沉淀高通量测序 | 第46-48页 |
| 1.4.14 RNA免疫共沉淀高通量测序 | 第48-53页 |
| 1.4.15 病毒纯化 | 第53-56页 |
| 1.4.16 大鼠球囊拉伤模型 | 第56-57页 |
| 1.4.17 免疫荧光染色检测成纤维中平滑肌分化基因表达 | 第57-58页 |
| 1.5 统计分析 | 第58-59页 |
| 2. 结果分析 | 第59-81页 |
| 2.1 病变血管标本THO亚基表达 | 第59-61页 |
| 2.1.1 免疫组织化学染色技术检测THO亚基在病变血管中的表达 | 第59-60页 |
| 2.1.2 定量RT-PCR检测THO亚基在病变血管中的表达 | 第60页 |
| 2.1.3 蛋白印迹技术检测THO亚基在病变血管中的表达 | 第60-61页 |
| 本部分实验小结 | 第61页 |
| 2.2 体外细胞水平检测合成表型平滑肌细胞中THO亚基的表达 | 第61-63页 |
| 2.2.1 小鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养与鉴定 | 第61-62页 |
| 2.2.2 THOC2、THOC5亚基在VSMC不同培养代数中的表达 | 第62-63页 |
| 2.2.3 THOC2、THOC5亚基在PDGF-BB、FBS刺激的原代培养VSMC中表达 | 第63页 |
| 本部分实验小结 | 第63页 |
| 2.3 Thoc2和Thoc5敲低对原代培养VSMC平滑肌表型转换的影响 | 第63-66页 |
| 2.3.1 Thoc2和Thoc5敲低对原代培养VSMC平滑肌标志基因表达水平的影响 | 第64-65页 |
| 2.3.2 Thoc2和Thoc5敲低后原代培养VSMC的迁移和增殖变化 | 第65-66页 |
| 本部分实验小结 | 第66页 |
| 2.4 RNA-seq高通量测序检测原代培养VSMC差异基因表达 | 第66-69页 |
| 2.4.1 THOC5特异性调控VSMC中标志性基因的表达 | 第66-67页 |
| 2.4.2 THOC5对VSMC基因的结合偏向 | 第67-68页 |
| 2.4.3 Thoc5KD和PDGF-BB/PDGF-DD刺激因子的RNA-seq结果聚类分析 | 第68-69页 |
| 本部分实验小结 | 第69页 |
| 2.5 THOC5调控VSMC标志性基因的分子机制 | 第69-71页 |
| 2.5.1 THOC5未在在转录水平调控VSMC标志性基因表达 | 第69-70页 |
| 2.5.2 THOC5维持VSMC标志性基因的稳定性 | 第70-71页 |
| 本部分实验小结 | 第71页 |
| 2.6 RIP-Seq揭示THOC5和THOC2亚基对VSMC标志性基因的转录后调控机制 | 第71-74页 |
| 2.6.1 RIP-Seq检测THOC5和THOC2结合VSMC标志性基因的能力 | 第71-73页 |
| 2.6.2 RIP-qPCR检测THOC5和THOC2亚基与VSMC标志性基因结合能力变化 | 第73-74页 |
| 本部分实验小结 | 第74页 |
| 2.7 THOC5和THOC2亚基在VSMC表型转换中作用 | 第74-77页 |
| 2.7.1 THOC5和THOC2亚基在P3和P10代VSMC表型转换中与标志性基因的结合丢失 | 第74-76页 |
| 2.7.2 THOC5和THOC2亚基共同调控VSMC标志性基因 | 第76-77页 |
| 本部分实验小结 | 第77页 |
| 2.8 THOC5过表达促进平滑肌标志性基因表达 | 第77-81页 |
| 2.8.1 大鼠颈动脉球囊损伤引起内膜增生 | 第77-78页 |
| 2.8.2 过表达THOC5对平滑肌标志性基因基因的影响 | 第78-79页 |
| 2.8.3 定量RT-PCR检测损伤动脉局部过表达THOC5后平滑肌标志性基因表达 | 第79页 |
| 2.8.4 血管外膜成纤维细胞中过表达THOC5 | 第79-81页 |
| 本部分实验小结 | 第81页 |
| 3. 讨论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 综述 | 第90-101页 |
| 参考文献 | 第96-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 个人简介 | 第103-104页 |
