| 本研究的创新点 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 研究背景 | 第15-45页 |
| 1. 酿酒酵母极性生长概述 | 第15-26页 |
| 1.1 酿酒酵母极性生长与细胞周期 | 第15-20页 |
| 1.2 酿酒酵母极性生长与细胞骨架 | 第20-25页 |
| 1.3 酿酒酵母极性生长与囊泡运输 | 第25-26页 |
| 2. Septin的结构和功能 | 第26-33页 |
| 2.1 Septin亚基的结构 | 第27-28页 |
| 2.2 Septin复合体的组装 | 第28-30页 |
| 2.3 Septin复合体的功能 | 第30-33页 |
| 3. Rho GTP酶功能概述 | 第33-43页 |
| 3.1 Rho GTP酶的结构和调控因子 | 第34-35页 |
| 3.2 酿酒酵母Rho GTP酶Cdc42的功能 | 第35-39页 |
| 3.3 酿酒酵母Rho GTP酶Rho3的功能 | 第39-41页 |
| 3.4 酿酒酵母Rho GTP酶Rho1的功能 | 第41-43页 |
| 4. 本课题的研究目的、内容和意义 | 第43-45页 |
| 4.1 研究目的 | 第44页 |
| 4.2 研究内容 | 第44页 |
| 4.3 研究意义 | 第44-45页 |
| 第二章 Bem3定位结构域的鉴定及定位机制研究 | 第45-72页 |
| 1. 实验材料 | 第45-53页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第45-48页 |
| 1.2 药品和试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 培养基和溶液的配制 | 第49-53页 |
| 2. 实验方法 | 第53-59页 |
| 2.1 基因克隆与质粒构建 | 第53-54页 |
| 2.2 酿酒酵母快速转化法 | 第54页 |
| 2.3 酿酒酵母细胞培养及显微观察 | 第54-55页 |
| 2.4 酿酒酵母总蛋白的提取 | 第55页 |
| 2.5 蛋白质印迹实验 | 第55-56页 |
| 2.6 酿酒酵母基因组的提取 | 第56-57页 |
| 2.7 基因敲除及修饰 | 第57页 |
| 2.8 酵母双杂交检测 | 第57页 |
| 2.9 酵母双杂交文库筛选 | 第57-59页 |
| 2.10 双分子荧光互补 | 第59页 |
| 3. 实验结果 | 第59-69页 |
| 3.1 Bem3含有两个独立的定位结构域 | 第59-62页 |
| 3.2 酵母双杂交筛选与Bem3相互作用的蛋白 | 第62-63页 |
| 3.3 Bem3~(TD2)与Epo1存在相互作用 | 第63-65页 |
| 3.4 Epo1招募Bem3~(TD2)定位到极性位点 | 第65-67页 |
| 3.5 Bem3的coiled coil结构域介导Bem3形成多聚体 | 第67页 |
| 3.6 Bem3多聚体的形成对其调控Cdc42的功能具有重要作用 | 第67-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-71页 |
| 4.1 Bem3实现极性定位的机制 | 第69-70页 |
| 4.2 Bem3在体内形成多聚体的功能意义 | 第70-71页 |
| 5. 小结 | 第71-72页 |
| 第三章 Bem3参与调控septin组织的机制研究 | 第72-91页 |
| 1. 实验材料 | 第72-75页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第72-74页 |
| 1.2 药品和试剂 | 第74-75页 |
| 1.3 培养基和溶液的配制 | 第75页 |
| 2. 实验方法 | 第75-76页 |
| 2.1 基因克隆与质粒构建 | 第75页 |
| 2.2 酿酒酵母二倍体分孢子 | 第75-76页 |
| 2.3 EMS诱变 | 第76页 |
| 3. 实验结果 | 第76-89页 |
| 3.1 Bem3参与调控septin组织的区域鉴定 | 第76-78页 |
| 3.2 Bem3~(TD2)与septin组织存在功能性相互作用 | 第78-81页 |
| 3.3 Bem~(TD2)调控septin组织的功能与极性复合体相关 | 第81-82页 |
| 3.4 Bem3与Kss1在septin组装位点存在相互作用 | 第82-85页 |
| 3.5 EMS诱变筛选与bem3△合成缺陷的突变体 | 第85-89页 |
| 4. 讨论 | 第89-90页 |
| Bem3参与调控septin组织的机制 | 第89-90页 |
| 5. 小结 | 第90-91页 |
| 第四章 Bem3调控Rho3和Rho1的功能研究 | 第91-107页 |
| 1. 实验材料 | 第91-93页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第91-93页 |
| 1.2 药品和试剂 | 第93页 |
| 1.3 培养基和溶液的配制 | 第93页 |
| 2. 实验方法 | 第93-94页 |
| 2.1 基因克隆与质粒构建 | 第93-94页 |
| 2.2 酵母细胞壁成分几丁质染色 | 第94页 |
| 2.3 酵母细胞壁成分葡聚糖染色 | 第94页 |
| 3. 实验结果 | 第94-104页 |
| 3.1 Bem3与Rho3和Rho1存在相互作用 | 第94-95页 |
| 3.2 Bem3与Rho3相互作用的功能研究 | 第95-100页 |
| 3.2.1 过高活性的Rho3阻碍胞质分裂,破坏septin组织 | 第95-97页 |
| 3.2.2 BEM3的缺失加剧过高活性Rho3造成的细胞形态缺陷 | 第97-99页 |
| 3.2.3 多拷贝BEM3减弱过高活性Rho3造成的细胞形态缺陷 | 第99-100页 |
| 3.3 Bem3与Rho1相互作用的功能研究 | 第100-104页 |
| 3.3.1 BEM3的缺失不影响细胞壁合成 | 第100页 |
| 3.3.2 BEM3的缺失不能挽救rho1突变体的缺陷表型 | 第100-102页 |
| 3.3.3 过量表达Bem3~(△N6)加剧rho1-5突变体的缺陷表型 | 第102-104页 |
| 4. 讨论 | 第104-106页 |
| 4.1 Cdc42与Rho3和Rho1之间的功能关系 | 第104-105页 |
| 4.2 Bem3调控Cdc42,Rho3和Rho1活性的功能分析 | 第105-106页 |
| 5. 小结 | 第106-107页 |
| 研究总结及展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-125页 |
| 在读期间发表的论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
