| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| 1.鱼类的渗透压调控机制 | 第19-21页 |
| 1.1 鱼类对环境渗透压的感应 | 第19-20页 |
| 1.2 鱼类对环境渗透压的信号传导 | 第20页 |
| 1.3 鱼类对环境渗透压的适应性应答 | 第20-21页 |
| 2.内分泌激素与鱼类对环境盐度的适应 | 第21-22页 |
| 3.催乳素与鱼类对环境盐度的适应 | 第22-33页 |
| 3.1 催乳素的结构、合成分泌与功能 | 第23-26页 |
| 3.1.1 催乳素的结构 | 第23-25页 |
| 3.1.2 催乳素的合成分泌 | 第25页 |
| 3.1.3 催乳素的功能 | 第25-26页 |
| 3.2 催乳素受体的结构、表达分布与激活机制 | 第26-30页 |
| 3.2.1 催乳素受体的结构 | 第26-27页 |
| 3.2.2 催乳素受体的表达分布 | 第27-28页 |
| 3.2.3 催乳素受体的激活机制 | 第28-30页 |
| 3.3 催乳素在鱼类渗透压调控中的作用目标与机制 | 第30-33页 |
| 3.3.1 鳃 | 第30-31页 |
| 3.3.2 肾脏 | 第31-32页 |
| 3.3.3 肠 | 第32页 |
| 3.3.4 膀胱和皮肤 | 第32-33页 |
| 4.本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 金钱鱼催乳素及其受体基因的克隆、组织分布与表达分析 | 第35-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 2.1.1 动物材料 | 第36页 |
| 2.1.2 主要试剂、耗材 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第38-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 2.2.1 金钱鱼各组织总RNA的提取与cDNA模板的合成 | 第40-41页 |
| 2.2.2 金钱鱼催乳素(saprl)及其受体(saprlr1和saprlr2)基因的克隆 | 第41-45页 |
| 2.2.3 序列分析 | 第45页 |
| 2.2.4 saprl、saprlr1和saprlr2基因的sqRT-PCR组织分布分析 | 第45-46页 |
| 2.2.5 saPRL于金钱鱼脑中的免疫组化定位分析 | 第46-47页 |
| 2.2.6 不同盐度驯化下saprlr1和saprlr2基因在金钱鱼鳃、肾脏中的RT-qPCR表达情况分析 | 第47页 |
| 2.3 实验结果 | 第47-61页 |
| 2.3.1 saprl基因的克隆、序列分析以及蛋白三维结构预测 | 第47-51页 |
| 2.3.2 saprl1和saprlr2基因的克隆、序列分析以及蛋白三维结构预测 | 第51-59页 |
| 2.3.3 saprl、saprlr1和saprlr2的全组织分布分析 | 第59-60页 |
| 2.3.4 saPRL在脑中的组织定位 | 第60页 |
| 2.3.5 不同盐度驯化下saprlr1和saprlr2在鳃和肾脏中的表达分析.. | 第60-61页 |
| 2.4 讨论 | 第61-65页 |
| 第三章 急性低渗胁迫下金钱鱼催乳素及相关基因的表达情况分析 | 第65-79页 |
| 3.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 3.1.1 动物材料 | 第66页 |
| 3.1.2 主要试剂、耗材 | 第66页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第66-67页 |
| 3.2 实验方法 | 第67-71页 |
| 3.2.1 急性低渗胁迫实验的样品采集 | 第67页 |
| 3.2.2 WesternBlot分析 | 第67-69页 |
| 3.2.3 金钱鱼血清PRL的含量分析(ELISA) | 第69-70页 |
| 3.2.4 金钱鱼鳃、肾脏中saprlr1,saprlr2及下游相关基因的RT-qPCR表达情况分析 | 第70-71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-76页 |
| 3.3.1 急性低渗胁迫下金钱鱼脑中saPRL的表达情况分析 | 第71-72页 |
| 3.3.2 急性低渗胁迫下金钱鱼血清PRL的含量变化情况分析 | 第72页 |
| 3.3.3 急性低渗胁迫下金钱鱼鳃、肾脏中saprlr1,saprlr2及下游离子转运蛋白的RT-qPCR表达情况分析 | 第72-74页 |
| 3.3.4 Ras/MAPK(ERK)信号转导通路在急性低渗刺激下的激活 | 第74-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-79页 |
| 第四章 金钱鱼催乳素的原核表达及蛋白鉴定 | 第79-92页 |
| 4.1 实验材料 | 第79-80页 |
| 4.1.1 主要试剂、耗材 | 第79页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第79-80页 |
| 4.2 实验方法 | 第80-86页 |
| 4.2.1 saPRL-pET28a(+)原核表达质粒的构建 | 第80-82页 |
| 4.2.2 蛋白的诱导表达和可溶性鉴定 | 第82-84页 |
| 4.2.3 可溶性重组蛋白的纯化 | 第84-85页 |
| 4.2.4 saPRL重组蛋白的活性检测 | 第85-86页 |
| 4.3 实验结果 | 第86-91页 |
| 4.3.1 saPRL-pET28a(+)原核表达质粒的构建 | 第86-87页 |
| 4.3.2 saPRL重组蛋白诱导表达条件的优化及可溶性鉴定 | 第87-89页 |
| 4.3.3 saPRL重组蛋白的纯化 | 第89-90页 |
| 4.3.4 saPRL重组蛋白的活性检测 | 第90-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-92页 |
| 第五章 金钱鱼催乳素重组蛋白对下游离子转运蛋白的调控 | 第92-101页 |
| 5.1 实验材料 | 第92页 |
| 5.1.1 主要试剂、耗材 | 第92页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-95页 |
| 5.2.1 金钱鱼鳃、肾脏细胞的原代培养和传代培养 | 第92-94页 |
| 5.2.2 saPRL重组蛋白处理细胞后不同时间点下离子通道蛋白的表达水平分析 | 第94页 |
| 5.2.3 不同浓度saPRL重组蛋白对细胞中离子通道蛋白的表达水平分析 | 第94-95页 |
| 5.3 实验结果 | 第95-98页 |
| 5.3.1 saPRL重组蛋白处理SG细胞后不同时间点下各相关基因的表达变化 | 第95-96页 |
| 5.3.2 saPRL重组蛋白处理SK细胞后不同时间点下各相关基因的表达变化 | 第96-97页 |
| 5.3.3 不同浓度saPRL重组蛋白对SG细胞中各相关基因的表达影响 | 第97页 |
| 5.3.4 不同浓度saPRL重组蛋白对SK细胞中各相关基因的表达影响 | 第97-98页 |
| 5.4 讨论 | 第98-101页 |
| 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 附录 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
