| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1.1 禽流感病毒简介及NP蛋白 | 第12-18页 |
| 1.1.2 流感病毒与宿主因子的关系 | 第18-20页 |
| 1.1.3 HSP27的理化性质,基本结构及生理功能 | 第20-24页 |
| 1.2 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 病毒和细胞 | 第25页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第25页 |
| 2.1.3 引物合成与测序 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要试剂、酶和试剂盒 | 第26-29页 |
| 2.1.5 重要仪器和设备 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 细胞的培养和接毒 | 第29页 |
| 2.2.2 细胞的冻存和复苏 | 第29-30页 |
| 2.2.3 TRIzol法抽提总RNA | 第30页 |
| 2.2.4 一步法RT-PCR | 第30-31页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.6 基因片段的胶回收 | 第31-32页 |
| 2.2.7 目的基因的酶切和连接 | 第32-33页 |
| 2.2.8 转化及质粒的鉴定 | 第33页 |
| 2.2.9 去内毒素质粒的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.10 转染 | 第34-35页 |
| 2.2.11 Western blotting检测 | 第35-36页 |
| 2.2.12 qPCR检测相关基因的变化 | 第36页 |
| 2.2.13 蚀斑形成单位(PFU)检测流感病毒的增殖 | 第36-37页 |
| 2.2.14 双荧光素酶的检测 | 第37页 |
| 2.2.15 Co-IP检测HSP27与NP的互作 | 第37-38页 |
| 2.2.16 Confocal检测HSP27与NP的细胞定位 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-59页 |
| 3.1 病毒感染对HSP27表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.2 HSP27基因的克隆及相关质粒的构建 | 第40页 |
| 3.3 HSP27的真核表达和沉默 | 第40-42页 |
| 3.4 HSP27的表达对禽流感病毒rNS1-wt增殖的影响 | 第42-46页 |
| 3.4.1 qPCR检测流感病毒感染A549细胞后相关基因的表达 | 第42-44页 |
| 3.4.2 Western blotting检测病毒NP蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 3.4.3 PFU检测流感病毒感染A549细胞后病毒的增殖 | 第45-46页 |
| 3.5 HSP27的表达对其它病毒粒子的影响 | 第46-49页 |
| 3.5.1 HSP27的表达对VSV-GFP增殖的影响 | 第46-47页 |
| 3.5.2 HSP27的表达对rNA-wt增殖的影响 | 第47-49页 |
| 3.6 HSP27与NP的互作 | 第49-52页 |
| 3.7 SB203580对流感病毒增殖的影响 | 第52-56页 |
| 3.8 HSP27对病毒聚合酶活力的影响 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 HSP27对病毒增殖的调控作用 | 第59-61页 |
| 4.2 HSP27对细胞信号通路的影响 | 第61-62页 |
| 5 总结 | 第62-64页 |
| 5.1 主要结论 | 第62页 |
| 5.2 值得进一步探索的问题 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
