| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 细胞粘附分子家族 | 第10页 |
| 1.2 VCAM-1基因 | 第10-12页 |
| 1.3 VCAM-1蛋白结构 | 第12-14页 |
| 1.4 VCAM-1蛋白表达 | 第14页 |
| 1.5 VCAM-1的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.5.1 调节炎症反应 | 第14-15页 |
| 1.5.2 参与免疫应答反应 | 第15-16页 |
| 1.5.3 参与淋巴细胞的归巢和再循环 | 第16页 |
| 1.6 小结 | 第16-18页 |
| 2 血管内皮细胞粘附分子VCAM-1胞外区D1-D4蛋白原核表达 | 第18-35页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 仪器与材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.2 材料与试剂 | 第19-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.3.1 复苏小鼠成纤维细胞(NIH/3T3) | 第22-23页 |
| 2.3.2 小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)中提取总RNA | 第23页 |
| 2.3.3 RNA浓度测定及检测 | 第23-24页 |
| 2.3.4 RT-PCR扩增VCAM-1基因 | 第24页 |
| 2.3.5 PCR扩增VCAM-1胞外区基因 | 第24-25页 |
| 2.3.6 PCR产物与T载体连接 | 第25-26页 |
| 2.3.7 提取质粒pMD19-T-VCAM-1送宝生物测序 | 第26页 |
| 2.3.8 重组质粒pET28a-VCAM-1构建与鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.9 pET28a-VCAM-1转化大肠杆菌BL21并由IPTG诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-33页 |
| 2.4.1 RT-PCR扩增VCAM-1 D1-D4结构域基因 | 第29页 |
| 2.4.2 PCR鉴定重组质粒pMD19-T-VCAM-1 D1-D4连接 | 第29-31页 |
| 2.4.3 VCAM-1 D1-D4结构域基因测序 | 第31页 |
| 2.4.4 重组pET28a-VCAM-1 D1-D4载体的构建以及鉴定 | 第31页 |
| 2.4.5 pET28a-VCAM-1 D1-D4诱导表达 | 第31-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 3 血管内皮细胞粘附分子VCAM-1胞外区D1-D4蛋白真核表达 | 第35-49页 |
| 3.1 前言 | 第35-37页 |
| 3.2 仪器与材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第37页 |
| 3.2.2 材料与试剂 | 第37-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 提取质粒pMD19-T-VCAM-1 D1-D4双酶切鉴定 | 第39页 |
| 3.3.2 pMD19-T-VCAM-1 D1-D4质粒与表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc双酶切 | 第39-40页 |
| 3.3.3 VCAM-1 D1-D4与真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc连接 | 第40页 |
| 3.3.4 质粒转化至大肠杆菌DH5α | 第40页 |
| 3.3.5 PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.3.6 重组质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4双酶切鉴定 | 第40页 |
| 3.3.7 脂质体转染 | 第40-41页 |
| 3.3.8 G418筛选 | 第41页 |
| 3.3.9 细胞总蛋白提取并SDS-PAGE电泳检测 | 第41页 |
| 3.3.10 VCAM-1 D1-D4结构域蛋白纯化 | 第41页 |
| 3.3.11 Western blot | 第41-42页 |
| 3.3.12 共聚焦观察pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒成功转染Raji细胞 | 第42页 |
| 3.3.13 显微镜观察转染前后细胞形态变化 | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-47页 |
| 3.4.1 提取质粒pMD19-T-VCAM-1 D1-D4双酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.4.2 PCR鉴定重组质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4连接成功 | 第42-43页 |
| 3.4.3 重组质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.4 细胞转染与G418筛选 | 第44页 |
| 3.4.5 共聚焦检测pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒成功转染Raji细胞 | 第44-45页 |
| 3.4.6 重组pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4真核表达 | 第45页 |
| 3.4.7 Western blot检测目的蛋白VCAM-1 D1-D4 | 第45-47页 |
| 3.4.8 显微镜观察pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒转染Raji细胞形态变化 | 第47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-48页 |
| 3.6 小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
