| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第13-26页 |
| 1.1 稻瘟病及稻瘟菌 | 第13-15页 |
| 1.1.1 稻瘟病概述 | 第13页 |
| 1.1.2 稻瘟菌概述 | 第13-15页 |
| 1.1.3 稻瘟病的防治 | 第15页 |
| 1.2 CYP51 | 第15-21页 |
| 1.2.1 CYP51概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 CYP51分布及功能 | 第16页 |
| 1.2.3 CYP51序列特征及晶体结构 | 第16-21页 |
| 1.2.4 稻瘟菌的CYP51 | 第21页 |
| 1.3 三唑类抑制剂 | 第21-25页 |
| 1.3.1 三唑类抑制剂种类 | 第21-23页 |
| 1.3.2 三唑类抑制剂的杀菌机制 | 第23页 |
| 1.3.3 真菌产生三唑类抗药性的机制 | 第23-25页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 第二章 不同稻区稻瘟菌对三唑类药物敏感性差异机制分析 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂与工具酶 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 试供菌株的活化及保存 | 第28-29页 |
| 2.2.2 三唑类药物的配制 | 第29页 |
| 2.2.3 稻瘟菌对三唑类药物敏感性测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 稻瘟菌基因组DNA提取 | 第30页 |
| 2.2.5 CYP51 F1和F2基因的扩增及回收 | 第30-32页 |
| 2.2.6 DH5α大肠杆菌热击感受态细胞制备 | 第32页 |
| 2.2.7 CYP51 F1和F2基因连接克隆测序 | 第32-33页 |
| 2.2.8 CYP51 F1和F2序列的分析 | 第33页 |
| 2.2.9 REP-PCR分析菌株遗传背景 | 第33-34页 |
| 2.2.10 稻瘟菌RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.11 RNA反转录cDNA | 第35页 |
| 2.2.12 F1和F2基因荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-47页 |
| 2.3.1 不同稻区稻瘟菌对三唑类药物抑制率测定结果 | 第36-38页 |
| 2.3.2 不同稻区稻瘟菌对三唑类药物频率分布 | 第38页 |
| 2.3.3 REP-PCR分析结果 | 第38-41页 |
| 2.3.4 敏感性不同的菌株CYP51基因序列分析 | 第41-45页 |
| 2.3.5 敏感性不同的菌株CYP51 F1和F2基因表达量分析 | 第45-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 2.5 结论 | 第48-50页 |
| 第三章 稻瘟菌CYP51F2突变体构建及其与烯唑醇结合特点分析 | 第50-76页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第50页 |
| 3.1.2 药物及试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-55页 |
| 3.2.1 突变位点选择 | 第51页 |
| 3.2.2 模板质粒准备 | 第51-52页 |
| 3.2.3 DH5α电击转化感受态的制备 | 第52页 |
| 3.2.4 电击转化 | 第52页 |
| 3.2.5 BL21(DE3)Rosetta热激转化感受态的制备及热激转化 | 第52页 |
| 3.2.6 MG-CYP51 PCR介导的突变体构建 | 第52-53页 |
| 3.2.7 MG-CYP51F2及突变体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第53-54页 |
| 3.2.8 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 3.2.9 MG-CYP51重组蛋白的制备 | 第54-55页 |
| 3.2.10 蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| 3.2.11 MG-CYP51及突变体重组蛋白与抑制剂的结合光谱分析 | 第55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-73页 |
| 3.3.1 MG-CYP51保守氨基酸突变位点选择及突变策略设计 | 第55-56页 |
| 3.3.2 保守突变位点的引物设计 | 第56-58页 |
| 3.3.3 模板质粒的酶切鉴定 | 第58页 |
| 3.3.4 突变体构建测序结果 | 第58-60页 |
| 3.3.5 野生型MG-CYP51及突变体的SDS-PAGE检测 | 第60页 |
| 3.3.6 突变体的蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| 3.3.7 MG-CYP51突变体重组蛋白与烯唑醇的结合光谱分析 | 第61-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-74页 |
| 3.5 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
