| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文章综述 | 第8-18页 |
| 1.1 T细胞中的信号转导 | 第8-13页 |
| 1.1.1 免疫接头蛋白 | 第9页 |
| 1.1.2 接头蛋白FYB1 | 第9-11页 |
| 1.1.3 接头蛋白SKAP1 | 第11-12页 |
| 1.1.4 FYB1-SKAP1蛋白模块及在整合素介导的T细胞免疫粘附中的作用 | 第12-13页 |
| 1.2 基因敲除小鼠 | 第13-15页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞 | 第13页 |
| 1.2.2 基因敲除小鼠 | 第13页 |
| 1.2.3 基因敲除小鼠的制备 | 第13-15页 |
| 1.3 蛋白质相互作用的研究 | 第15-16页 |
| 1.3.1 蛋白质相互作用 | 第15页 |
| 1.3.2 免疫共沉淀 | 第15-16页 |
| 1.3.3 蛋白质多肽分子鉴定技术 | 第16页 |
| 1.4 研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 SKAP1和FYB双基因敲除小鼠的繁育 | 第18-34页 |
| 2.1 实验仪器和试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.1 分子生物学试剂和耗材 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 小鼠基因型的鉴定 | 第19-22页 |
| 2.2.1.1 小鼠全基因组的抽提 | 第19-20页 |
| 2.2.1.2 小鼠Skap1基因的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 小鼠Fyb基因的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 核酸电泳 | 第22页 |
| 2.2.2 双基因敲除小鼠的配种及繁育 | 第22-23页 |
| 2.2.3 小鼠基因表达的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.3.1 小鼠脾脏细胞的获取 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 小鼠脾脏细胞蛋白的获取 | 第24页 |
| 2.2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第24页 |
| 2.2.3.4 转膜 | 第24-25页 |
| 2.2.3.5 孵育抗体 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 亲代小鼠基因型的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 Fyb~(-/-)Skap1~(+/+)和Fyb~(+/+)Skap1~(-/-)小鼠杂交子代小鼠基因型的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 Fyb~(+/-)Skap1~(+/-)与Fyb~(-/-)Skap1~(+/+)小鼠杂交子代小鼠基因型的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.4 Fyb~(-/-)Skap1~(+/-)小鼠自交子代小鼠基因型的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.5 Fyb~(-/-)Skap1~(-/-)小鼠自交子代小鼠基因型的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 野生型、单基因敲除、双基因敲除小鼠基因表达的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 T细胞中与SKAP1相互作用蛋白的鉴定 | 第34-40页 |
| 3.1 实验仪器和试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.1 分子生物学试剂、细胞及耗材 | 第34页 |
| 3.1.2 器材和仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35页 |
| 3.2.1 细胞收样和Co-IP | 第35页 |
| 3.2.2 考马斯亮蓝染色与蛋白质质谱鉴定(LC-MS/MS) | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-38页 |
| 3.3.1 SKAP1Co-IP考马斯亮蓝染色结果 | 第35-36页 |
| 3.3.2 SKAP1Co-IP免疫印迹结果 | 第36页 |
| 3.3.3 SKAP1Co-IP质谱鉴定结果 | 第36-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 全文总结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
