| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 概述 | 第8-20页 |
| ·胆固醇氧化酶基本特性 | 第8-12页 |
| ·ChOx 的来源及分类 | 第8-9页 |
| ·ChOx 基本酶学性质 | 第9-11页 |
| ·表面活性剂和有机溶剂对ChOx 活性和稳定性的影响 | 第11-12页 |
| ·ChOx 底物特异性 | 第12页 |
| ·ChOx 的分子结构与催化机理 | 第12-16页 |
| ·ChOx 的结构 | 第12-13页 |
| ·活性位点 | 第13-14页 |
| ·ChOx 的催化作用机理 | 第14-15页 |
| ·有关酶分子改造的研究 | 第15-16页 |
| ·ChOx 的应用概况 | 第16-18页 |
| ·目前主要应用情况 | 第16-17页 |
| ·潜在应用前景 | 第17-18页 |
| ·立题目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 转印膜高通量筛选耐温性ChOx 方法的建立 | 第20-28页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-22页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·ChOx 酶活测定及显色反应 | 第21-22页 |
| ·定位膜转印 | 第22页 |
| ·有关数据来源 | 第22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-27页 |
| ·ChOx 转印膜的选择 | 第22-23页 |
| ·ChOx 产酶条件优化对转印效果的影响 | 第23-24页 |
| ·转印膜吸附处理关键因子的考察 | 第24-26页 |
| ·转印膜高通量筛选耐温性ChOx 方法的建立 | 第26-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 散在点突变与定点突变改造提高ChOx 耐温性 | 第28-50页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-34页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·ChOx 基因的随机易错PCR 处理 | 第30-31页 |
| ·定点突变方法 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体构建 | 第32-34页 |
| ·同源蛋白序列分析和比对的方法 | 第34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-48页 |
| ·利用易错PCR 对ChOAb 进行散在点突变 | 第34-37页 |
| ·定点突变理性改造ChOx 的耐温性 | 第37-41页 |
| ·散在点突变的突变结果分析 | 第41-46页 |
| ·定点突变获得的突变酶的表达与初步分析 | 第46-48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第四章 正向突变酶的酶学性质变化研究 | 第50-60页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-51页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第50页 |
| ·ChOx 酶活力测定 | 第50页 |
| ·Ec-BpE-X*的诱导表达及分离纯化 | 第50-51页 |
| ·酶学分析的基本方法 | 第51页 |
| ·计算机模拟构建突变酶的结构模型 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-58页 |
| ·突变酶的诱导表达及分离纯化 | 第52页 |
| ·突变酶最适pH 值及pH 值稳定性的变化 | 第52-54页 |
| ·最适作用温度及温度稳定性的考察 | 第54-55页 |
| ·突变酶和原酶Km 值和Vmax 比较 | 第55-57页 |
| ·点组合突变带来的酶学性质变化 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 延时诱导培养Ec-BpE-M2 的发酵条件优化 | 第60-75页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·菌体活化 | 第62页 |
| ·培养条件 | 第62-63页 |
| ·菌体浓度测定 | 第63页 |
| ·ChOx 活力测定 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-73页 |
| ·IPTG 诱导M2 突变酶表达 | 第63-66页 |
| ·乳糖延时诱导Ec-BpE-M2 表达 | 第66-69页 |
| ·IPTG 诱导与乳糖延时诱导的比较 | 第69-71页 |
| ·乳糖延时诱导Ec-BpE-M2 表达的流加发酵 | 第71-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 主要结论与展望 | 第75-77页 |
| 主要结论 | 第75页 |
| 展望 | 第75-77页 |
| 论文创新点 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-91页 |
| 缩略词表 | 第91-92页 |
| 重组菌、质粒及突变酶名称简写说明 | 第92-93页 |
| 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第93页 |
