| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 不可分型流感嗜血杆菌 | 第11-15页 |
| 1.1.1 不可分型流感嗜血杆菌简介 | 第11页 |
| 1.1.2 纤溶酶原的结构和功能 | 第11-12页 |
| 1.1.3 病原菌利用宿主Plg的致病机制 | 第12-13页 |
| 1.1.4 NTHi表面Plg受体E蛋白 | 第13-15页 |
| 1.2 血浆脂蛋白 | 第15-17页 |
| 1.2.1 血浆脂蛋白的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 血浆脂蛋白的代谢 | 第16-17页 |
| 1.3 脂蛋白(a) | 第17-20页 |
| 1.3.1 Lp(a)的结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Lp(a)的代谢 | 第18-20页 |
| 1.3.3 Lp(a)的生理功能 | 第20页 |
| 1.3.4 Lp(a)分离纯化的研究现状 | 第20页 |
| 1.4 立题依据 | 第20-21页 |
| 1.5 研究内容 | 第21-22页 |
| 2 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1 仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 主要试剂 | 第22-27页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 试剂盒和标准品 | 第23页 |
| 2.2.3 填料及纯化缓冲液 | 第23-24页 |
| 2.2.4 电泳及转膜缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2.5 常用缓冲液 | 第25页 |
| 2.2.6 引物 | 第25页 |
| 2.2.7 菌株与载体 | 第25-26页 |
| 2.2.8 培养基 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-37页 |
| 3.1 rPE、rPEΔKK两种重组蛋白的表达纯化 | 第27-34页 |
| 3.1.1 不可分型流感嗜血杆菌ATCC49247细菌基因组的提取 | 第27-28页 |
| 3.1.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 3.1.3 pe及peΔkk目的片段的扩增 | 第28-29页 |
| 3.1.4 PCR扩增产物的纯化 | 第29页 |
| 3.1.5 pASK-IBA37Plus质粒的提取 | 第29-30页 |
| 3.1.6 pASK-IBA-37Plus质粒的酶切 | 第30页 |
| 3.1.7 pASK-IBA-37Plus质粒的回收纯化 | 第30页 |
| 3.1.8 pe、peΔkk目的片段与pASK-IBA-37Plus质粒的连接 | 第30-31页 |
| 3.1.9 制备E.coliBL21及JM109感受态 | 第31页 |
| 3.1.10 连接产物的转化至E.coliJM109和抗性筛选 | 第31-32页 |
| 3.1.11 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第32页 |
| 3.1.12 基因测序 | 第32页 |
| 3.1.13 重组质粒转化至E.coliBL | 第32页 |
| 3.1.14 rPE、rPEΔKK蛋白的诱导表达 | 第32-33页 |
| 3.1.15 rPE、rPEΔKK蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.1.16 BCA法测定蛋白含量 | 第33-34页 |
| 3.2 Lp(a)的分离及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.1 超速离心初步分离Lp(a) | 第34页 |
| 3.2.2 QFF阴离子交换层析纯化Lp(a) | 第34-35页 |
| 3.2.3 BCA法测定蛋白含量 | 第35页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE检测Lp(a)纯度 | 第35页 |
| 3.2.5 WesternBlot检测Apo(a)和ApoB-100 | 第35页 |
| 3.3 rPE与Lp(a)的相互作用 | 第35-36页 |
| 3.3.1 ELISA检测rPE与Lp(a)的相互作用 | 第35-36页 |
| 3.3.2 Pulldown检测rPE与Lp(a)的相互作用 | 第36页 |
| 3.4 rPE与Lp(a)的作用机制的研究 | 第36-37页 |
| 3.4.1 ELISA检测rPE与LDL的结合情况 | 第36页 |
| 3.4.2 ELISA检测EACA对rPE与Lp(a)结合的抑制 | 第36页 |
| 3.4.3 ELISA检测rPE、rPEΔKK与Plg的结合情况 | 第36页 |
| 3.4.4 ELISA检测Lp(a)对rPE与Plg结合的抑制 | 第36-37页 |
| 4 实验结果与分析 | 第37-47页 |
| 4.1 rPE、rPEΔKK两种重组蛋白的表达纯化 | 第37-41页 |
| 4.1.1 不可分型流感嗜血杆菌基因组的提取结果 | 第37页 |
| 4.1.2 pe和peΔkk目的片段的扩增结果 | 第37-38页 |
| 4.1.3 菌落PCR鉴定阳性克隆结果 | 第38页 |
| 4.1.4 基因测序结果 | 第38页 |
| 4.1.5 rPE、rPEΔKK蛋白的诱导表达结果 | 第38-39页 |
| 4.1.6 rPE、rPEΔKK蛋白的纯化结果 | 第39-40页 |
| 4.1.7 BCA法测定蛋白含量 | 第40-41页 |
| 4.2 Lp(a)的分离及鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.1 超速离心分离Lp(a) | 第41页 |
| 4.2.2 阴离子交换层析纯化Lp(a) | 第41-42页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE检测Lp(a)纯度及Westernblot鉴定 | 第42页 |
| 4.3 rPE、rPEΔKK与Lp(a)的结合 | 第42-44页 |
| 4.3.1 ELISA检测rPE、rPEΔKK与Lp(a)的结合 | 第42-43页 |
| 4.3.2 Pulldown结合Westernblot检测rPE、rPEΔKK与Lp(a)的结合 | 第43-44页 |
| 4.4 rPE、rPEΔKK与Lp(a)的结合机制 | 第44-47页 |
| 4.4.1 ELISA检测rPE与LDL的结合情况 | 第44页 |
| 4.4.2 ELISA检测EACA对rPE与Lp(a)结合的抑制 | 第44-45页 |
| 4.4.3 ELISA检测rPE、rPEΔKK与Plg的结合情况 | 第45页 |
| 4.4.4 ELISA检测Lp(a)对rPE与Plg结合的抑制 | 第45-47页 |
| 5 讨论 | 第47-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
