| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 卤醇脱卤酶概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 卤醇脱卤酶的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 卤醇脱卤酶的结构及催化机制 | 第13-15页 |
| 1.2 卤醇脱卤酶催化的动力学特性 | 第15页 |
| 1.3 卤醇脱卤酶催化的脱卤和开环反应其应用 | 第15-17页 |
| 1.4 卤醇脱卤酶的改造 | 第17-19页 |
| 1.5 论文的研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 HheC卤离子结合位点的丙氨酸扫描 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第20-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要实验仪器和设备 | 第20页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 丙氨酸突变体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.2 丙氨酸突变体的表达与检测 | 第23-24页 |
| 2.2.3 丙氨酸突变体活性的检测 | 第24页 |
| 2.2.4 丙氨酸突变体对映体选择性的检测 | 第24页 |
| 2.3 实验结果和讨论 | 第24-31页 |
| 2.3.1 丙氨酸突变体的构建 | 第24-26页 |
| 2.3.2 丙氨酸突变体的表达和优化 | 第26页 |
| 2.3.3 丙氨酸突变体的活性检测 | 第26-29页 |
| 2.3.4 丙氨酸突变体对映体选择性的检测 | 第29-31页 |
| 2.4 本章总结 | 第31-32页 |
| 第三章 饱和突变对HheC卤离子结合位点的改造 | 第32-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 饱和突变体文库的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 饱和突变体文库的活性筛选 | 第33-34页 |
| 3.2.3 野生型HheC及突变体的表达和纯化 | 第34页 |
| 3.2.4 野生型HheC及突变体活性检测和稳态动力学常数测量 | 第34-35页 |
| 3.2.5 突变体的对映体选择性的测定 | 第35页 |
| 3.3 实验结果和讨论 | 第35-41页 |
| 3.3.1 以 1,3-DCP为模式底物的活性改造 | 第35-38页 |
| 3.3.2 以 2-CPE为底物的活性的改造 | 第38-39页 |
| 3.3.3 以 2-CPE为底物的对映体选择性的改造 | 第39-41页 |
| 3.4 本章总结 | 第41-42页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第42-48页 |
| 4.1 全文总结 | 第42-43页 |
| 4.2 后续工作展望 | 第43-48页 |
| 4.2.1 卤醇脱卤酶卤离子结合位点残基的删除 | 第43-44页 |
| 4.2.2 卤醇脱卤酶HheC和HheA Loop3的互换 | 第44-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第55-56页 |
