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玉米叶夹角基因ZmCLA4的图位克隆与功能分析

致谢第4-9页
摘要第9-11页
第一章 文献综述第11-31页
    1 植物叶夹角的研究进展第12-21页
        1.1 玉米叶夹角的相关研究第12-15页
            1.1.1 玉米叶夹角的研究现状第12-13页
            1.1.2 玉米叶夹角QTL定位研究-第13-14页
            1.1.3、叶夹角相关基因的克隆第14-15页
        1.2 水稻分蘖/叶夹角的相关研究第15-19页
            1.2.1 水稻分蘖/叶夹角的研究现状第15-16页
            1.2.2 水稻分蘖/叶夹角的定位与克隆第16-19页
        1.3 植物叶夹角形成的分子机制研第19-21页
            1.3.1 植物激素调控途径第19-20页
            1.3.2 叶枕部位机械组织的形成路径第20页
            1.3.3 自主路径第20-21页
    2 图位克隆技术第21-28页
        2.1 图位克隆技术概括第21页
            2.1.1 图位克隆研究背景第21页
            2.1.2 图位克隆的原理第21页
        2.2 图位克隆的技术环节第21-23页
            2.2.1 目的基因的初级定位第22页
            2.2.2 基因精细定位第22页
            2.2.3 目标基因精细物理图谱的构建第22页
            2.2.4 候选基因的获得和功能验证第22-23页
        2.3 图位克隆的技术的应用第23-28页
            2.3.1 图位克隆技术在模式植物中的新发展第23页
            2.3.2 图位克隆技术在大基因组作物中的应用第23-25页
            2.3.3 图位克隆技术对数量性状基因的应用第25-28页
    3 玉米相关基因的功能验证研究进展第28-30页
        3.1 基因的生物信息学分析第28页
        3.2 基因的体内表达规律分析第28页
        3.3 功能获得策略分析第28页
        3.4 功能失活策略第28-29页
        3.5 基因编码产物相互作用蛋白的研究第29-30页
    4 本研究的目的与意义第30-31页
第二章 玉米叶夹角主效QTL定位及效应分析第31-45页
    1 材料与方法第31-34页
        1.1 供试材料第31-32页
        1.2 田间试验设计第32-33页
        1.3 田间性状调查第33页
        1.4 统计分析第33页
        1.5 基因型分析和分子标记遗传连锁图谱的构建第33-34页
            1.5.1 DNA的提取与纯化第33页
            1.5.2 SSR分子标记第33页
            1.5.3 SSR标记分析及连锁图谱的构建第33-34页
        1.6 QTL定位分析第34页
        1.7 q LA4-1 区段新标记开发第34页
        1.8 背景恢复率的计算第34页
    2 结果与分析第34-42页
        2.1 初步定位结果分析第34-36页
            2.1.1 表型分析第34-35页
            2.1.2 叶夹角主效QTL初步定位及其效应分析第35-36页
        2.2 精细定位结果分析第36-42页
            2.2.1 主效QTL q LA4-1 近等基因系的构建第36-37页
            2.2.2 SSR标记分析第37页
            2.2.3 目标区域内新标记的开发第37-38页
            2.2.4 叶夹角主效QTL q LA4-1 的验证及效应分析第38-39页
            2.2.5 q LA4-1 精细定位过程第39-42页
    3 讨论第42-45页
        3.1 数量性状定位策略第42-43页
        3.2 精细定位的效果及影响因素第43页
        3.3 分子标记辅助选择的应用第43-45页
第三章、玉米Zm CLA4基因的克隆及表达分析第45-64页
    1 材料与方法第45-53页
        1.1 试验材料及田间试验设计第45-46页
        1.2 试验耗材、试剂第46页
        1.3 试验方法第46-53页
            1.3.1 玉米总RNA的提取第46页
            1.3.2 c DNA第一链的合成第46-47页
            1.3.3 玉米基因组DNA提取与纯化第47页
            1.3.4 Zm CLA4 基因全长 c DNA 的克隆第47-50页
            1.3.5 玉米Zm CLA4基因DNA全长的获得第50页
            1.3.6 PCR扩增产物的回收第50-51页
            1.3.7 回收产物与T载体的连接第51页
            1.3.8 连接产物的转化第51-52页
            1.3.9 阳性克隆的PCR检测第52页
            1.3.10分析测序结果第52页
            1.3.11 Zm CLA4时空表达分析第52-53页
            1.3.12 q LA4-1 的候选基因的关联分析第53页
    2.结果与分析第53-60页
        2.1 RNA提取、纯化、第一链合成及检测第53-54页
        2.2 Zm CLA4 c DNA克隆及序列分析第54页
        2.3 D132和D132-NIL中Zm CLA4-1 序列的比较分析第54-57页
        2.4 Zm CLA4基因表达模式分析第57-60页
        2.5 候选基因Zm CLA4的关联分析第60页
    3 讨论第60-64页
        3.1 Zm CLA4基因序列分析第61页
        3.2 Zm CLA4基因时空表达规律分析第61-62页
        3.3 Zm CLA4基因的关联分析第62-64页
第四章 Zm CLA4基因的功能分析第64-83页
    1 材料与方法第64-73页
        1.1 Zm CLA4亚细胞定位第64-68页
            1.1.1 表达载体第64页
            1.1.2 常用培养基第64-66页
            1.1.3 融合表达载体构建第66页
            1.1.4 洋葱表皮中亚细胞定位第66-68页
        1.2 Zm CLA4基因转化玉米和水稻第68-72页
            1.2.1 受体材料第68页
            1.2.2 RNAi干扰载体载体构建第68页
            1.2.3 Zm CLA4过量表达载体构建第68-69页
            1.2.4 玉米茎尖转基因过程第69-70页
            1.2.5 根瘤农杆菌介导培育转基因水稻第70-71页
            1.2.6 转基因植株鉴定方法第71-72页
        1.3 细胞学分析第72页
            1.3.1 试验材料第72页
            1.3.2 临时切片制备过程第72页
        1.4 Zm CLA4向地性反应试验第72-73页
            1.4.1 试验材料第72页
            1.4.2 种子预处理第72页
            1.4.3 试剂配制第72-73页
    2 结果与分析第73-79页
        2.1 Zm CLA4蛋白的亚细胞定位第73页
        2.2 转基因功能验证第73-76页
        2.3 细胞学分析第76-77页
        2.4 Zm CLA4在向地性的作用第77-79页
    3 讨论第79-83页
        3.1 转基因植株验证和亚细胞定位第79-80页
        3.2 Zm CLA4参与茎的向地性来调控玉米叶夹角第80-81页
        3.3 Zm CLA4通过改变细胞的发育来调节叶夹角第81-82页
        3.4 q LA4-1 在玉米株型改良中的应用第82-83页
第五章 主要结论第83-85页
    1 q LA4-1 QTL的初步定位和精细定位第83页
    2 Zm CLA4基因克隆和表达分析第83页
    3 Zm CLA4基因的功能验证第83页
    4 Zm CLA4基因功能分子机制研究第83-85页
参考文献第85-99页
附录1 玉米总DNA的提取与纯化第99-101页
附录2 SSR分析操作方法及试剂配制第101-104页
附录3 质粒DNA的提取第104-105页
附录4 精细定位所开发SSR标记第105-111页
附录5 作者简介第111-112页
ABSTRACT第112-114页

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