| 摘要 | 第7-11页 |
| ABSTRACT | 第11-16页 |
| 前言 | 第22-44页 |
| 1 细胞凋亡与肠道功能 | 第22-28页 |
| 1.1 细胞凋亡的概念 | 第23页 |
| 1.2 细胞凋亡机制 | 第23-26页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶的激活与特性 | 第24页 |
| 1.2.2 线粒体途径 | 第24-25页 |
| 1.2.3 死亡受体途径 | 第25页 |
| 1.2.4 内质网途径 | 第25-26页 |
| 1.3 细胞凋亡与肠道功能的关系 | 第26-28页 |
| 1.3.1 细胞凋亡与炎性肠病 | 第26页 |
| 1.3.2 细胞凋亡与肠道癌症 | 第26-27页 |
| 1.3.3 细胞凋亡与缺血再灌注 | 第27-28页 |
| 2 氧化应激与细胞凋亡 | 第28-35页 |
| 2.1 氧化应激和自由基 | 第28-30页 |
| 2.1.1 线粒体：细胞氧自由基产生的重要场所 | 第28-29页 |
| 2.1.2 ROS 和氧化损伤 | 第29-30页 |
| 2.1.3 线粒体：ROS 作用的靶点 | 第30页 |
| 2.2 ROS 和细胞凋亡 | 第30-33页 |
| 2.2.1 ROS 诱导细胞凋亡的机制 | 第31页 |
| 2.2.2 ROS 和细胞色素 C 释放机制 | 第31-32页 |
| 2.2.3 心磷脂过氧化调控细胞色素 C 的释放 | 第32-33页 |
| 2.3 细胞 ROS、氧化还原和抗氧化防御系统 | 第33-35页 |
| 2.3.1 抗氧化防御系统 | 第33-34页 |
| 2.3.2 线粒体抗氧化防御系统 | 第34-35页 |
| 3 肠道抗氧化生物学 | 第35-39页 |
| 3.1 肠上皮的结构与功能 | 第35-36页 |
| 3.2 小肠细胞内氧化还原状态和抗氧化防御体系 | 第36-37页 |
| 3.2.1 细胞氧化还原状态的概念 | 第36页 |
| 3.2.2 谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶系统 (GSH/GSSG) | 第36页 |
| 3.2.3 硫氧还蛋白氧化还原系统（Trx/TrxSS） | 第36-37页 |
| 3.2.4 半胱氨酸氧化还原系统(Cys/CySS) | 第37页 |
| 3.3 肠道氧化应激与肠道病理学 | 第37-39页 |
| 3.3.1 肠道氧化应激与细胞的命运：增殖、分化、凋亡 | 第37-38页 |
| 3.3.2 氧化应激、氧化还原状态与肠道疾病 | 第38-39页 |
| 4 氧化应激与抗氧化治疗 | 第39-44页 |
| 4.1 抗氧化治疗与肠道疾病 | 第40页 |
| 4.2 N-乙酰半胱氨酸——GSH 的前体物质 | 第40-41页 |
| 4.3 早期断奶应激综合症 | 第41-44页 |
| 第一章 仔猪早期断奶过程中肠道细胞凋亡研究 | 第44-66页 |
| 1 材料与方法 | 第44-58页 |
| 1.1 试验设计 | 第44-46页 |
| 1.2 肠组织 DNA Ladder 检测 | 第46-47页 |
| 1.2.1 试剂及仪器 | 第46页 |
| 1.2.2 肠黏膜 DNA 提取 | 第46-47页 |
| 1.2.3 电泳 | 第47页 |
| 1.3 空肠组织中凋亡酶含量的测定 | 第47-49页 |
| 1.3.1 试剂及仪器 | 第47页 |
| 1.3.2 肠道组织匀浆中蛋白含量的测定 | 第47-48页 |
| 1.3.3 Caspase-3 ELISA 检测 | 第48-49页 |
| 1.3.4 Caspase-8 ELISA 检测 | 第49页 |
| 1.3.5 Caspase-9 ELISA 检测 | 第49页 |
| 1.4 空肠肠组织 TUNEL 检测 | 第49-53页 |
| 1.4.1 实验原理 | 第49-50页 |
| 1.4.2 试剂 | 第50页 |
| 1.4.3 设备 | 第50页 |
| 1.4.4 组织包埋程序 | 第50-51页 |
| 1.4.5 组织石蜡切片的制作 | 第51页 |
| 1.4.6 肠组织 TUNEL 检测 | 第51-53页 |
| 1.5 肠细胞透射电镜观察 | 第53-54页 |
| 1.5.1 原理 | 第53页 |
| 1.5.2 试剂材料 | 第53页 |
| 1.5.3 操作步骤 | 第53-54页 |
| 1.6 肠组织凋亡相关基因实时荧光定量 PCR 检测 | 第54-58页 |
| 1.6.1 试剂及仪器 | 第54-55页 |
| 1.6.2 总 RNA 的提取 | 第55-56页 |
| 1.6.3 凋亡相关基因荧光定量 PCR | 第56-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-64页 |
| 2.1 肠组织 DNA Ladder 检测 | 第58-59页 |
| 2.2 早期断奶对仔猪空肠组织中凋亡酶含量的影响 | 第59-60页 |
| 2.3 早期断奶对仔猪空肠肠细胞凋亡的影响 | 第60-61页 |
| 2.4 透射电镜检测早期断奶对仔猪空肠肠细胞形态结构的影响 | 第61页 |
| 2.5 凋亡相关基因实时荧光定量 PCR 检测 | 第61-64页 |
| 3 讨论 | 第64-65页 |
| 3.1 断奶后仔猪肠细胞形态学变化 | 第64页 |
| 3.2 断奶后仔猪肠细胞凋亡分子机理研究 | 第64-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 第二章 早期断奶仔猪自由基代谢与肠细胞凋亡及肠屏障功能的关系 | 第66-84页 |
| 1 材料与方法 | 第66-76页 |
| 1.1 试验材料 | 第66-67页 |
| 1.1.1 试验设计 | 第66-67页 |
| 1.1.2 试验药品 | 第67页 |
| 1.1.3 实验仪器和设备 | 第67页 |
| 1.2 血清抗氧化指标的测定 | 第67-73页 |
| 1.2.1 血清中微量 MDA 含量的检测方法 | 第67-68页 |
| 1.2.2 血清中 SOD 活力的检测方法 | 第68-69页 |
| 1.2.3 血清中 GSH-Px 活力的检测 | 第69-70页 |
| 1.2.4 血清中 NO 含量测定 | 第70-71页 |
| 1.2.5 血清中 H2O2的测定 | 第71-72页 |
| 1.2.6 血清抑制羟自由基能力检测 | 第72-73页 |
| 1.3 酶联免疫法检测血清皮质醇、低氧诱导因子及 TNF-α含量 | 第73-75页 |
| 1.3.1 皮质醇 | 第73-74页 |
| 1.3.2 低氧诱导因子 | 第74页 |
| 1.3.3 肿瘤坏死因子α | 第74-75页 |
| 1.4 肠黏膜通透性检测 | 第75页 |
| 1.4.1 血清 DAO 含量测定 | 第75页 |
| 1.4.2 血清 IFABP 含量测定 | 第75页 |
| 1.5 紧密连接相关基因荧光定量 PCR 检测 | 第75-76页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第75页 |
| 1.5.2 肠组织总 RNA 提取 | 第75页 |
| 1.5.3 紧密连接相关基因荧光定量 PCR 检测 | 第75-76页 |
| 1.6 数据分析 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-80页 |
| 2.1 血清皮质醇、TNF-α和 HIF-1α含量 | 第76-77页 |
| 2.2 血清 DAO 和 IFABP 测定 | 第77页 |
| 2.3 血清抗氧化指标及自由基含量测定 | 第77-78页 |
| 2.4 紧密连接相关基因荧光定量 PCR 检测 | 第78页 |
| 2.5 凋亡酶含量与抗氧化指标和自由基含量的相关性分析 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 3.1 早期断奶对仔猪血清皮质醇、HIF-1α和 TNF-α含量的影响 | 第80页 |
| 3.2 早期断奶对仔猪血清 DAO 和 IFABP 含量的影响 | 第80-81页 |
| 3.3 早期断奶对仔猪血清抗氧化状态的影响 | 第81-82页 |
| 3.4 早期断奶对仔猪肠黏膜紧密连接相关蛋白表达的影响 | 第82-83页 |
| 4 小结 | 第83-84页 |
| 第三章 断奶仔猪小肠基因表达谱及细胞凋亡代谢网络分析 | 第84-114页 |
| 1 材料与方法 | 第84-89页 |
| 1.1 试验材料： | 第84-85页 |
| 1.1.1 实验设计 | 第84页 |
| 1.1.2 试剂及仪器 | 第84-85页 |
| 1.2 RNA 抽提和纯化 | 第85页 |
| 1.3 芯片实验 | 第85-87页 |
| 1.3.1 样品 RNA 的放大和标记 | 第85页 |
| 1.3.2 芯片杂交 | 第85-86页 |
| 1.3.3 芯片扫描 | 第86页 |
| 1.3.4 芯片数据分析 | 第86-87页 |
| 1.4 细胞周期及凋亡相关基因荧光定量 PCR 验证 | 第87-89页 |
| 1.4.1 引物设计 | 第87页 |
| 1.4.2 荧光定量 PCR 检测 | 第87页 |
| 1.4.3 数据分析 | 第87-89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-110页 |
| 2.1 RNA 样品质控 | 第89-90页 |
| 2.2 芯片实验质控 | 第90-95页 |
| 2.2.1 芯片检出率检测 | 第90-91页 |
| 2.2.2 杂交信号均一性检测 | 第91-92页 |
| 2.2.3 芯片杂交火山图 | 第92-94页 |
| 2.2.4 芯片杂交箱线图 | 第94页 |
| 2.2.5 芯片杂交 PCA 图分析 | 第94-95页 |
| 2.3 差异表达基因筛选结果 | 第95-101页 |
| 2.4 差异表达基因 heatmap 图 | 第101-102页 |
| 2.5 差异表达基因 GO 聚类分析 | 第102-104页 |
| 2.6 差异表达基因 KEGG 代谢途径分析 | 第104-106页 |
| 2.7 细胞周期及凋亡相关基因实时荧光定量 PCR 验证 | 第106-107页 |
| 2.8 断奶仔猪主要代谢调控网络 | 第107页 |
| 2.9 细胞周期代谢图绘制 | 第107-109页 |
| 2.10 免疫调控代谢图绘制 | 第109-110页 |
| 3. 讨论 | 第110-113页 |
| 3.1 断奶后仔猪肠组织差异表达基因的筛选 | 第110页 |
| 3.2 断奶后仔猪肠细胞凋亡、增殖及细胞周期调控间的关系 | 第110-113页 |
| 3.3 断奶后仔猪肠 MAPK、JAK-STAT 途径与细胞周期调控 | 第113页 |
| 4 小结 | 第113-114页 |
| 第四章 N-乙酰半胱氨酸(NAC)对仔猪断奶应激和肠道细胞凋亡的调控作用及其机理 | 第114-129页 |
| 1 材料与方法 | 第114-117页 |
| 1.1 试验材料： | 第114-115页 |
| 1.1.1 试验设计 | 第114-115页 |
| 1.1.2 试验仪器 | 第115页 |
| 1.2 血清皮质醇、TNF-α和 HIF-1α含量 | 第115页 |
| 1.3 血清和肝脏抗氧化指标测定 | 第115页 |
| 1.3.1 血清和肝脏 SOD 测定 | 第115页 |
| 1.3.2 血清和肝脏 GSH-PX 活力测定 | 第115页 |
| 1.3.3 血清和肝脏 MDA 含量测定 | 第115页 |
| 1.4 空肠组织 HE 染色 | 第115-116页 |
| 1.4.1 常规石蜡切片制作 | 第115页 |
| 1.4.2 常规苏木精-伊红染色 | 第115-116页 |
| 1.5 空肠组织 TUNEL 染色 | 第116页 |
| 1.6 空肠组织透射电镜检测 | 第116页 |
| 1.7 凋亡及细胞周期相关基因 mRNA 表达 | 第116-117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-126页 |
| 2.1 血清皮质醇、TNF-α和 HIF-1α含量 | 第117-118页 |
| 2.2 早期断奶对仔猪血清和肝脏组织抗氧化能力的影响 | 第118页 |
| 2.3 早期断奶对仔猪空肠绒毛结构的影响 | 第118-119页 |
| 2.4 肠组织 TUNEL 检测 | 第119-120页 |
| 2.5 肠细胞透射电镜观察 | 第120-125页 |
| 2.6 细胞周期及凋亡相关基因实时荧光定量 PCR 检测 | 第125-126页 |
| 3 讨论 | 第126-128页 |
| 3.1 NAC 对断奶仔猪抗氧化能力及应激状态的影响 | 第126-127页 |
| 3.2 NAC 对断奶仔猪肠细胞凋亡及细胞周期调控 | 第127-128页 |
| 4 小结 | 第128-129页 |
| 全文总结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-149页 |
| 附录 | 第149-171页 |
| 文章部分缩略词表 | 第171-172页 |
| 本文创新点及有待解决的问题 | 第172-173页 |
| 致谢 | 第173-174页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第174页 |
