| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 縮略词 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 目的基因RNAi表达载体的构建、鉴定与包装 | 第18-57页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 1.1.1 菌种和细胞株 | 第18-19页 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂 | 第19-22页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-43页 |
| 1.2.1 ERα、ERβ和Smad4基因沉默核苷酸链的设计 | 第24-28页 |
| 1.2.2 扩增慢病毒siRNA载体PLL3.7质粒 | 第28-30页 |
| 1.2.3 构建基因沉默重组质粒及鉴定 | 第30-34页 |
| 1.2.4 重组质粒对目的基因表达沉默的检测 | 第34-41页 |
| 1.2.5 重组PLL3.7质粒的慢病毒包装 | 第41-42页 |
| 1.2.6 检测包装慢病毒颗粒的病毒滴度 | 第42-43页 |
| 1.3 统计方法 | 第43页 |
| 1.4 结果 | 第43-53页 |
| 1.4.1 设计siRNA的结果 | 第43-45页 |
| 1.4.2 RNAi质粒构建及鉴定结果 | 第45-49页 |
| 1.4.3 RT-PCR检测重组质粒对目的基因表达沉默效果的电泳条带灰度比 | 第49-50页 |
| 1.4.4 重组质粒对目的基因表达水平的沉默效果 | 第50-51页 |
| 1.4.5 重组质粒对目的基因蛋白表达沉默效率 | 第51-53页 |
| 1.4.6 病毒滴度的测定结果 | 第53页 |
| 1.5 讨论 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 第二章 雌激素β受体对小鼠椎体生长期骺板软骨细胞分化的调控作用 | 第57-78页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第57-63页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第57-58页 |
| 2.1.2 主要仪器与耗材 | 第58-59页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第59-63页 |
| 2.2 实验方法 | 第63-68页 |
| 2.2.1 小鼠椎体骺板原代软骨细胞的提取 | 第63-64页 |
| 2.2.2 用重组质粒慢病毒颗粒转染小鼠椎体骺板软骨细胞建立模型 | 第64页 |
| 2.2.3 雌激素受体基因亚型对小鼠软骨细胞增殖作用的调控 | 第64-65页 |
| 2.2.4 用Realtime-PCR检测ERs基因沉默对小鼠椎体骺板软骨细胞中Runx2、BMP2表达的影响 | 第65-68页 |
| 2.3 统计分析 | 第68页 |
| 2.4 结果 | 第68-74页 |
| 2.4.1 重组质粒慢病毒载体转染靶细胞荧光观察结果 | 第68页 |
| 2.4.2 MTT法测各组细胞生长曲线的结果 | 第68-70页 |
| 2.4.3 流式细胞仪检测各组细胞周期的差异结果 | 第70-71页 |
| 2.4.4 各组软骨细胞中Runx2和BMP2基因表达检测结果 | 第71-74页 |
| 2.5 讨论 | 第74-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 第三章 雌激素核受体通过smad4基因介导Runx和BMP基因的表达调控骺板软骨细胞分化和增殖 | 第78-98页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第78-86页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第78页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第78-86页 |
| 3.2 实验方法 | 第86-87页 |
| 3.2.1 实验设计与分组 | 第86-87页 |
| 3.2.2 MTT法测Smad4基因沉默对细胞的生长曲线的影响 | 第87页 |
| 3.2.3 用Realtime-PCR检测Smad4基因沉默对ERs调控Runx2、BMP2表达的影响 | 第87页 |
| 3.3 统计学方法 | 第87页 |
| 3.4 结果 | 第87-94页 |
| 3.4.1 Smad4基因沉默对ERs调控软骨细胞生长曲线影响的结果 | 第87-90页 |
| 3.4.2 各组软骨细胞Smad4RNAi对Runx2和BMP2基因表达影响结果 | 第90-94页 |
| 3.5 讨论 | 第94-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 总结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 综述 | 第103-118页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 主要研究成果 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
