| 摘要 | 第8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 縮略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一章 miRNA-125b抑制骨肉瘤细胞增殖与转移的作用 | 第19-39页 |
| 1.1 引言 | 第19-20页 |
| 1.2 实验材料 | 第20-23页 |
| 1.2.1 细胞系来源和实验动物 | 第20页 |
| 1.2.2 患者临床资料 | 第20-21页 |
| 1.2.3 主要实验仪器 | 第21页 |
| 1.2.4 主要试剂耗材 | 第21-23页 |
| 1.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 1.4 实验方法 | 第24-31页 |
| 1.4.1 细胞培养与传代 | 第24页 |
| 1.4.2 实时定量RT-PCR的方法检查骨肉瘤组织、癌旁组织以及骨肉瘤细胞株MG63、Saos-2,U2os和人胚肾细胞HEK293中miRNA-125b的表达 | 第24-29页 |
| 1.4.3 miR-125b过表达或沉默质粒转染 | 第29-30页 |
| 1.4.4 CKK增殖实验检测质粒转染后MG-63细胞增殖情况 | 第30页 |
| 1.4.5 Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力 | 第30页 |
| 1.4.6 动物试验 | 第30-31页 |
| 1.4.7 统计学分析 | 第31页 |
| 1.5 实验结果 | 第31-35页 |
| 1.5.1 miRNA-125b在组织标本及4种不同细胞系中的表达 | 第31-32页 |
| 1.5.2 miRNA-125b对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响 | 第32-35页 |
| 1.5.3 动物实验 | 第35页 |
| 1.6 讨论 | 第35-38页 |
| 1.7 结论 | 第38-39页 |
| 第二章 miR-125b靶向调控MAPK信号通路MKK7的研究 | 第39-59页 |
| 2.1 引言 | 第39页 |
| 2.2 实验材料 | 第39-43页 |
| 2.2.1 细胞 | 第39-40页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第40页 |
| 2.2.3 主要试剂耗材 | 第40-42页 |
| 2.2.4 质粒准备 | 第42-43页 |
| 2.3 技术路线 | 第43-44页 |
| 2.4 实验方法 | 第44-50页 |
| 2.4.1 MG-63细胞复苏、培养、传代 | 第44页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第44-45页 |
| 2.4.3 RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.4.4 基因组DNA的消化 | 第46页 |
| 2.4.5 cDNA合成 | 第46-47页 |
| 2.4.6 实时定量PCR | 第47-48页 |
| 2.4.7 蛋白印记(Western blotting)实验分析 | 第48-50页 |
| 2.4.8 统计学分析 | 第50页 |
| 2.5 实验结果 | 第50-55页 |
| 2.5.1 生物信息学预测分析结果 | 第50-51页 |
| 2.5.2 RNA提取的质量控制 | 第51-52页 |
| 2.5.3 cDNA合成质量控制 | 第52页 |
| 2.5.4 实时定量结果 | 第52-53页 |
| 2.5.5 蛋白印迹实验结果 | 第53-54页 |
| 2.5.6 荧光素酶报告实验结果 | 第54-55页 |
| 2.6 讨论 | 第55-58页 |
| 2.7 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 综述 | 第65-99页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第99-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
