| 致谢 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 硝酸与亚硝酸对细菌生长的抑制作用及其分子机理 | 第14-23页 |
| 1.1.1 硝酸与亚硝酸对细菌的广泛影响 | 第14-15页 |
| 1.1.2 硝酸与亚硝酸对含[Fe-S]簇蛋白的影响 | 第15-17页 |
| 1.1.3 硝酸与亚硝酸对有氧呼吸途径的末端氧化酶的影响 | 第17-23页 |
| 1.1.3.1 细菌的有氧呼吸途径 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 亚硝酸及其衍生物与caa3-HCO之间的相互影响 | 第18-20页 |
| 1.1.3.3 亚硝酸及其衍生物与cbb3-HCO之间的相互作用 | 第20-21页 |
| 1.1.3.4 亚硝酸及其衍生物与细胞色素bd之间的相互作用 | 第21-23页 |
| 1.2 细菌对硝酸和亚硝酸的还原机制 | 第23-24页 |
| 1.3 S.oneidensis对氧气、硝酸和亚硝酸的还原机制 | 第24-27页 |
| 1.4 本研究的背景、主要内容及意义 | 第27-30页 |
| 2 硝酸与亚硝酸对S.oneidensis生长的影响 | 第30-49页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-35页 |
| 2.1.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第31-32页 |
| 2.1.2 S.oneidensis生长测定 | 第32页 |
| 2.1.3 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第32-33页 |
| 2.1.4 qRT-PCR分析 | 第33页 |
| 2.1.5 免疫印迹实验 | 第33-34页 |
| 2.1.6 硝酸和亚硝酸浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.2.1 有氧条件下,硝酸对S. oneidensis生长的影响 | 第35-37页 |
| 2.2.2 S.oneidensis在有氧条件下对硝酸的还原利用 | 第37-40页 |
| 2.2.3 有氧条件下,S.oneidensis对亚硝酸的应答 | 第40-41页 |
| 2.2.4 有氧条件下,S oneidensis中NrfA的表达量对亚硝酸还原的影响 | 第41-43页 |
| 2.2.5 还原电动势是亚硝酸滞后还原的主要原因 | 第43-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-49页 |
| 2.3.1 有氧条件下,S oneidensis对硝酸与亚硝酸的还原利用 | 第45-46页 |
| 2.3.2 有氧条件下,硝酸和亚硝酸对S.oneidensis的抑制作用 | 第46-49页 |
| 3 亚硝酸抑制S.oneidensis生长的机理 | 第49-72页 |
| 3.1 材料和方法 | 第50-54页 |
| 3.1.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第50-51页 |
| 3.1.2 基因敲除及回补 | 第51-52页 |
| 3.1.3 亚硝酸敏感性实验 | 第52页 |
| 3.1.4 NO对S.oneidensis生长的影响 | 第52页 |
| 3.1.5 转座子随机诱变 | 第52-53页 |
| 3.1.6 随机引物PCR | 第53页 |
| 3.1.7 Crp-His蛋白的融合表达与纯化 | 第53-54页 |
| 3.1.8 凝胶电泳迁移率实验(EMSA) | 第54页 |
| 3.2 结果与分析 | 第54-69页 |
| 3.2.1 crp基因缺失突变株对亚硝酸敏感性 | 第54-56页 |
| 3.2.2 利用转座子插入Δcrp基因组获得对亚硝酸抗性恢复的菌株 | 第56-61页 |
| 3.2.3 有氧条件下,细胞色素bd能够抵抗亚硝酸的抑制作用 | 第61-63页 |
| 3.2.4 有氧条件下,CcoPON是亚硝酸抑制S.oneidensis生长的靶点 | 第63-65页 |
| 3.2.5 NO对S.oneidensis的影响机制初步探讨 | 第65-69页 |
| 3.3 讨论 | 第69-72页 |
| 3.3.1 亚硝酸对S.oneidensis的抑制 | 第69-70页 |
| 3.3.2 S.oneidensis对NO应答机制的初步分析 | 第70-72页 |
| 4 ScyA在亚硝酸还原途径和有氧呼吸链中的位置 | 第72-91页 |
| 4.1 材料与方法 | 第73-76页 |
| 4.1.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第73-75页 |
| 4.1.2 细菌生长的测定 | 第75页 |
| 4.1.3 硝酸利用率测定 | 第75页 |
| 4.1.4 亚硝酸利用率测定 | 第75页 |
| 4.1.5 Nadi实验 | 第75-76页 |
| 4.1.6 pHHG102-scyAC35s点突变的构建 | 第76页 |
| 4.2 结果与分析 | 第76-88页 |
| 4.2.1 利用转座子插入Δcyd基因组获得对亚硝酸抗性恢复的菌株 | 第76-79页 |
| 4.2.2 ScyA基因与亚硝酸的关系 | 第79-80页 |
| 4.2.3 过量表达ScyA对亚硝酸还原过程的影响 | 第80页 |
| 4.2.4 膜间蛋白及ScyA点突变对Δcyd在亚硝酸中的生长表型的影响 | 第80-81页 |
| 4.2.5 其他末端氧化酶与Δcyd对亚硝酸抗性恢复的关系 | 第81-82页 |
| 4.2.6 ScyA与有氧呼吸的关系 | 第82-83页 |
| 4.2.7 ScyA传递电子给CcoPON | 第83-86页 |
| 4.2.8 ScyA在有氧呼吸链中的位置 | 第86-88页 |
| 4.3 讨论 | 第88-91页 |
| 4.3.1 ScyA与亚硝酸还原途径无关 | 第88-89页 |
| 4.3.2 ScyA可从CymA和PetABC中获得电子并传递给CcoPON | 第89-91页 |
| 5 论文总结 | 第91-93页 |
| 5.1 主要研究结论 | 第91页 |
| 5.2 创新之处 | 第91-92页 |
| 5.3 不足和展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 个人简历 | 第105页 |
