| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶的概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶分类与结构特性 | 第13-15页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶理化特性 | 第15-16页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第16-18页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-21页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达系统特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 巴斯德毕赤酵母表达宿主 | 第19-20页 |
| 1.2.3 巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第20页 |
| 1.2.4 提高外源蛋白表达量的方法 | 第20-21页 |
| 1.3 分子模拟 | 第21-24页 |
| 1.3.1 同源建模 | 第22-23页 |
| 1.3.2 分子对接 | 第23-24页 |
| 1.4 本课题研究的意义和内容 | 第24-26页 |
| 第二章 ABGL 在毕赤酵母的高效表达及初步应用研究 | 第26-67页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第27-31页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.2.3 分子克隆工具酶与试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.4 培养基与溶液的配制 | 第29-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-52页 |
| 2.3.1 基因工程菌的培养 | 第31页 |
| 2.3.2 单拷贝 ABGL 重组质粒的构建 | 第31-37页 |
| 2.3.3 多拷贝 ABGL 重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.4 酵母感受态细胞制备及酵母电转化 | 第39-40页 |
| 2.3.5 摇瓶水平甲醇诱导多拷贝 ABGL 菌株的高效表达 | 第40-43页 |
| 2.3.6 摇瓶水平诱导阶段混合补料的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.7 10L 发酵罐水平诱导阶段混合补料的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.8 50L 发酵罐水平高密度发酵诱导表达 | 第45-48页 |
| 2.3.9 ABGL 辅助纤维素酶水解纤维素的初步应用 | 第48-52页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第52-65页 |
| 2.4.1 单拷贝和多拷贝 ABGL 重组毕赤酵母表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 2.4.2 七叶苷显色平板筛选重组毕赤酵母 | 第55-56页 |
| 2.4.3 重组多拷贝 ABGL 毕赤酵母的摇瓶发酵产酶分析 | 第56-58页 |
| 2.4.4 摇瓶水平诱导阶段混合补料的影响 | 第58-59页 |
| 2.4.5 10L 发酵罐水平诱导阶段混合补料的影响 | 第59-61页 |
| 2.4.6 50L 发酵罐水平发酵单拷贝和多拷贝 ABGL 菌株 | 第61-63页 |
| 2.4.7 ABGL 辅助纤维素酶水解纤维素的初步应用 | 第63-65页 |
| 2.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第三章 ABGL 的 FN3 区域功能初步分析 | 第67-91页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第68-69页 |
| 3.2.1 硬件配置 | 第68页 |
| 3.2.2 数据库及软件配置 | 第68-69页 |
| 3.3 实验方法流程 | 第69-75页 |
| 3.3.1 ABGL 与 GH3 家族序列比对 | 第69页 |
| 3.3.2 ABGL 静电势表面分析 | 第69页 |
| 3.3.3 逆水解合成底物特异性的分子对接分析 | 第69-70页 |
| 3.3.4 突变实验研究 ABGL 蛋白 FN3 的功能 | 第70-72页 |
| 3.3.5 分子模拟研究 ABGL 蛋白 FN3 的功能 | 第72-75页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第75-90页 |
| 3.4.1 ABGL 与 GH3 家族β-葡萄糖苷酶序列比对 | 第75-77页 |
| 3.4.2 ABGL 静电势表面分析 | 第77-78页 |
| 3.4.3 ABGL 逆水解合成底物特异性的分子对接分析 | 第78-79页 |
| 3.4.4 突变实验研究 ABGL 蛋白 FN3 的功能 | 第79-80页 |
| 3.4.5 分子模拟研究 ABGL 蛋白 FN3 的功能 | 第80-90页 |
| 3.5 本章小结 | 第90-91页 |
| 结论与展望 | 第91-94页 |
| 1. 结论 | 第91-92页 |
| 2. 展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附件 | 第104页 |
