| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 研究背景 | 第10-12页 |
| 1.2.1 昆虫病原真菌所处环境中的逆境 | 第10-11页 |
| 1.2.2 P 型-ATPase ENA1 的相关研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 课题立题依据与研究目的 | 第12-13页 |
| 1.4 本研究涉及内容 | 第13-14页 |
| 1.4.1 生物信息学分析 | 第13页 |
| 1.4.2 MaENA1 基因功能分析 | 第13页 |
| 1.4.3 MaENA1 基因数字表达谱分析 | 第13-14页 |
| 1.5 技术路线 | 第14页 |
| 1.6 本课题的创新之处 | 第14-15页 |
| 2 绿僵菌 MaENA1 基因的克隆及功能研究 | 第15-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-20页 |
| 2.1.1 供试菌株及昆虫 | 第15页 |
| 2.1.2 载体质粒 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要培养基及实验溶液的配制 | 第16-18页 |
| 2.1.5 主要器材与仪器设备 | 第18-20页 |
| 2.2 主要方法 | 第20-40页 |
| 2.2.1 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第20页 |
| 2.2.2 农杆菌感受态细胞的制备与电转化农杆菌的方法 | 第20-21页 |
| 2.2.3 农杆菌与绿僵菌的共培养 | 第21-22页 |
| 2.2.4 MaENA1 基因全长比对及 cDNA ORF 全长克隆 | 第22-24页 |
| 2.2.5 MaENA1 的生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.6 MaENA1 基因敲除突变、回复突变、超表达载体的构建 | 第24-29页 |
| 2.2.7 快速微量提取真菌基因组 | 第29-30页 |
| 2.2.8 敲除转化子ΔMaENA1、回复转化子 CP 的筛选和初步验证 | 第30-31页 |
| 2.2.9 大量提取真菌基因组 DNA | 第31页 |
| 2.2.10 Southern blotting 验证敲除、回复转化子 | 第31-33页 |
| 2.2.11 真菌孢子 RNA 的提取及 cDNA 反转录 | 第33-35页 |
| 2.2.12 半定量实验 | 第35页 |
| 2.2.13 定量实验 | 第35-36页 |
| 2.2.14 表型、产孢量、萌发率分析 | 第36-37页 |
| 2.2.15 毒力测定实验 | 第37页 |
| 2.2.16 差异表达基因分析 | 第37-40页 |
| 2.2.17 数据统计及显著性分析 | 第40页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第40-64页 |
| 2.3.1 MaENA1 基因生物信息学分析 | 第40-43页 |
| 2.3.2 MaENA1 敲除、回复载体的构建及转化菌株验证 | 第43-44页 |
| 2.3.3 MaENA1 基因对生长及抗逆能力的影响 | 第44-48页 |
| 2.3.4 MaENA1 在 Na+胁迫下的表达 | 第48-49页 |
| 2.3.5 毒力测定 | 第49-50页 |
| 2.3.6 逆境应答基因与相关调节通路分析 | 第50-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-67页 |
| 3 主要实验结论与后续补充工作 | 第67-69页 |
| 3.1 主要实验结论 | 第67页 |
| 3.2 后续补充工作 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 附录 | 第81-92页 |
| A 序列 | 第81-83页 |
| B 附表 | 第83-92页 |
