| 第一部分 利用调节基因进行必特螺旋霉素单组分(埃莎霉素)产生菌的分子育种 | 第7-42页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-16页 |
| 1 必特螺旋霉素概述 | 第10-11页 |
| 2 基因工程育种抗生素产生菌研究进展 | 第11-14页 |
| 3 本论文研究目的和意义 | 第14页 |
| 4 论文研究内容和技术路线 | 第14-16页 |
| 实验材料 | 第16-20页 |
| 1. 生物信息学分析工具 | 第16页 |
| 2. 菌种 | 第16页 |
| 3. 基因和载体 | 第16页 |
| 4. 试剂与工具酶 | 第16-17页 |
| 5. 实验仪器 | 第17-18页 |
| 6. 培养基 | 第18-19页 |
| 7. 常用缓冲液 | 第19-20页 |
| 实验方法 | 第20-27页 |
| 1. E.coli质粒DNA小量提取 | 第20-21页 |
| 2. E.coli质粒DNA大量提取 | 第21页 |
| 3. 限制酶切反应 | 第21页 |
| 4. DNA电泳及片段回收 | 第21页 |
| 5. DNA连接反应 | 第21页 |
| 6. E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| 7. 质粒DNA转化E.coli DH5α感受态细胞 | 第22页 |
| 8. E.coli转化子的验证 | 第22页 |
| 9. 链霉菌原生质体的制备、再生及DNA转化原生质体 | 第22-23页 |
| 10. 链霉菌总DNA提取方法 | 第23页 |
| 11. 少量快速提取链霉菌总DNA | 第23-24页 |
| 12. PCR反应 | 第24-25页 |
| 13. 测序 | 第25页 |
| 14. 菌株筛选、发酵及发酵液的提取 | 第25页 |
| 15. 抗生素生物效价测定 | 第25-26页 |
| 16. 高效液相色谱分析 | 第26-27页 |
| 实验结果与讨论 | 第27-41页 |
| 1. 含ist-acyB2连锁基因重组质粒pSETl52-ia的构建 | 第27-32页 |
| 2. E.coli ET 12567/PUZ8002(pSET152-ia)阳性转化子的筛选和鉴定 | 第32-33页 |
| 3. acyB2基因整合型工程菌WSJ-IA的筛选和鉴定 | 第33-34页 |
| 4. WSJ-IA菌种发酵产生埃莎霉素Ⅰ组分的检测 | 第34-36页 |
| 5. WSJ-IA遗传稳定性实验 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 基因工程埃莎霉素Ⅰ产生菌以及出发菌株-螺旋霉素产生菌分类的初步鉴定 | 第42-82页 |
| 中文摘要 | 第42-43页 |
| Abstract | 第43-45页 |
| 前言 | 第45-52页 |
| 1. 必特螺旋霉素单组分-埃莎霉素Ⅰ概述 | 第45-46页 |
| 2. 放线菌分类学研究进展 | 第46-50页 |
| 3. 本论文的研究目的和意义 | 第50页 |
| 4. 论文的研究内容和技术路线 | 第50-52页 |
| 实验材料 | 第52-54页 |
| 1. 生物信息学分析工具 | 第52页 |
| 2. 菌种来源 | 第52页 |
| 3. 主要试剂 | 第52页 |
| 4. 主要仪器 | 第52页 |
| 5. 培养基 | 第52-54页 |
| 实验方法 | 第54-60页 |
| 1. 菌株的形态和培养特征观察 | 第54页 |
| 2. 菌株生理生化特征测定 | 第54-55页 |
| 3. 菌株细胞壁化学组成分析 | 第55-56页 |
| 4. 基于菌株16SrRNA基因序列的系统发育分析 | 第56-58页 |
| 5. 基于菌株看家基因蛋白序列的系统发育分析 | 第58-60页 |
| 实验结果与讨论 | 第60-81页 |
| 1. 菌株的形态和培养特征观察结果 | 第60页 |
| 2. 生理生化特征实验结果 | 第60-62页 |
| 3. 细胞壁化学成分分析 | 第62页 |
| 4. 基于菌株16S rRNA基因序列的系统发育分析 | 第62-67页 |
| 5. 基于菌株看家基因部分序列和蛋白序列的系统发育分析 | 第67-79页 |
| 讨论 | 第79-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 综述 | 第89-104页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 英文缩略语 | 第104-106页 |
| 附录 | 第106-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
