| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 低氧诱导心肌细胞凋亡研究现状 | 第13-19页 |
| 1.1.1 细胞的低氧适应性 | 第13-15页 |
| 1.1.2 低氧诱导心肌细胞凋亡的途径 | 第15-18页 |
| 1.1.3 参与低氧细胞凋亡相关介导因子 | 第18-19页 |
| 1.2 miRNA研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 miRNA概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 miRNA的形成与作用机制 | 第20-22页 |
| 1.2.3 miRNA研究方法 | 第22-23页 |
| 1.2.4 低氧相关miRNA——hypoxamiRs | 第23-24页 |
| 1.3 心肌细胞exosome研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3.1 Exosome基本概述 | 第24-25页 |
| 1.3.2 Exosome的研究方法 | 第25页 |
| 1.3.3 Exosome介导miRNA对心肌细胞的调控作用 | 第25-26页 |
| 2 研究目的意义 | 第26页 |
| 3 材料方法 | 第26-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第26-29页 |
| 3.1.1 实验所需细胞系、菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第28-29页 |
| 3.2 主要试验方法 | 第29-40页 |
| 3.2.1 H9c2细胞及HeLa细胞培养 | 第29-30页 |
| 3.2.2 Exosome NTA检测 | 第30-31页 |
| 3.2.3 细胞及exosome中total RNA抽提 | 第31页 |
| 3.2.4 Small RNA-seq | 第31-33页 |
| 3.2.5 H9c2细胞miRNA转染 | 第33-34页 |
| 3.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第34页 |
| 3.2.7 细胞活性检测 | 第34页 |
| 3.2.8 细胞膜完整性检测 | 第34-35页 |
| 3.2.9 H9c2细胞Hoechst 33342/PI荧光双染 | 第35页 |
| 3.2.10 qRT-PCR检测基因表达水平 | 第35-37页 |
| 3.2.11 miRNA靶基因3'-UTR双荧光素酶载体构建 | 第37-39页 |
| 3.2.12 HeLa细胞转染 | 第39-40页 |
| 3.2.13 荧光素酶活性检测 | 第40页 |
| 3.3 数据统计分析 | 第40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-55页 |
| 4.1 低氧诱导H9c2细胞凋亡 | 第40-41页 |
| 4.2 低氧介导H9c2细胞hypoxamiR表达 | 第41-44页 |
| 4.3 低氧影响H9c2细胞exosome中miRNAome | 第44-48页 |
| 4.3.1 H9c2细胞在低氧和常氧下能够产生exosome | 第44-45页 |
| 4.3.2 低氧改变H9c2细胞exosome中miRNAome | 第45-47页 |
| 4.3.3 Exosome差异表达miRNA功能富集 | 第47-48页 |
| 4.4 Exosome miRNA缓解低氧诱导的H9c2细胞凋亡 | 第48-52页 |
| 4.4.1 过表达miR-21-5p、miR-378-3p缓解低氧诱导的H9c2细胞凋亡 | 第48-50页 |
| 4.4.2 过表达miR-152-3p、let-7i-5p缓解低氧诱导的H9c2细胞凋亡 | 第50-52页 |
| 4.5 miR-152-3p和let-7i-5p分别与靶基因作用发挥抗凋亡效应 | 第52-55页 |
| 4.5.1 miRNA双荧光素酶报告系统载体构建 | 第52-53页 |
| 4.5.2 miRNA与靶基因结合发挥基因沉默效应 | 第53-54页 |
| 4.5.3 miRNA通过抑制其靶基因发挥抗凋亡作用 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-59页 |
| 5.1 H9c2细胞体外低氧模型构建 | 第55页 |
| 5.2 低氧对H9c2细胞中miRNA的影响 | 第55-56页 |
| 5.3 低氧对H9c2细胞exosome中miRNA的影响 | 第56-57页 |
| 5.4 Exosome miRNA在H9c2细胞低氧适应性中的作用 | 第57-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
