| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-19页 |
| ·手性化合物与生物催化 | 第10-12页 |
| ·手性二醇与环碳酸酯 | 第12-17页 |
| ·本课题的研究意义及思路 | 第17-19页 |
| 第2章 环碳酸酯水解酶产生菌的筛选 | 第19-33页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·筛选模型的确定 | 第19-21页 |
| ·采用的筛选方案-液体富集培养 | 第19-20页 |
| ·筛选流程 | 第20-21页 |
| ·材料与方法 | 第21-27页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·主要实验试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22页 |
| ·土样 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·底物 | 第22-23页 |
| ·培养条件 | 第23页 |
| ·筛选方法 | 第23页 |
| ·底物合成 | 第23-24页 |
| ·苯乙二醇的合成 | 第23-24页 |
| ·苯乙二醇环碳酸酯的合成 | 第24页 |
| ·分析方法 | 第24页 |
| ·薄板层析(TLC) | 第24页 |
| ·HPLC检测法 | 第24页 |
| ·菌种的鉴定-16S rDNA | 第24-27页 |
| ·菌株ECU0015的微生物学特征 | 第24-25页 |
| ·单菌落镜检 | 第25页 |
| ·DNA提取 | 第25页 |
| ·电泳检验 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增16S rDNA | 第26页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及检测 | 第26-27页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-32页 |
| ·几种筛选方法比较结果 | 第27页 |
| ·环碳酸酯水解酶的初筛结果 | 第27-28页 |
| ·复筛与终选结果 | 第28-29页 |
| ·菌种的鉴定-16S rDNA | 第29-32页 |
| ·ECU0015微生物学特征 | 第29页 |
| ·单菌落镜检 | 第29页 |
| ·DNA提取 | 第29页 |
| ·电泳检验 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增16S rDNA | 第30-31页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及检测 | 第31页 |
| ·转化大肠杆菌DH5a | 第31-32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 芽孢杆菌ECU0015产酶及反应特性研究 | 第33-48页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-38页 |
| ·底物和试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·培养条件 | 第33-34页 |
| ·苯乙二醇环碳酸酯及苯乙二醇HPLC分析方法的建立 | 第34-35页 |
| ·整体细胞酶活力的测定方法 | 第35-36页 |
| ·菌体干重的测定 | 第36页 |
| ·Bradford考马斯亮兰法测定蛋白质浓度 | 第36-37页 |
| ·细胞的破碎 | 第37页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第37-38页 |
| ·底物的诱导作用 | 第38页 |
| ·pH对酶反应速度及稳定性的影响 | 第38页 |
| ·温度对酶反应速度及稳定性的影响 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-47页 |
| ·碳源的选择 | 第38页 |
| ·氮源的选择 | 第38页 |
| ·碳、氮源含量的选择 | 第38-40页 |
| ·生长曲线 | 第40-41页 |
| ·环碳酸酯水解酶的初步纯化研究 | 第41-42页 |
| ·反应条件的优化 | 第42-47页 |
| ·反应温度和pH值对整细胞酶活性的影响 | 第42-43页 |
| ·反应温度和pH值对整细胞酶活稳定性的影响 | 第43-45页 |
| ·反应温度和pH值对整细胞酶活性的影响 | 第45-46页 |
| ·利用Bacillus sp.ECU0015水解苯乙二醇环碳酸酯的反应进程 | 第46-47页 |
| ·Bacillus sp.ECU0015对苯乙二醇的氧化作用以及环碳酸酯的水解影响 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 芽孢杆菌ECU0015整细胞酯酶的应用 | 第48-58页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·试剂和仪器 | 第48页 |
| ·培养基的组成与培养条件 | 第48页 |
| ·乙酰扁桃酸及其衍生物制备 | 第48页 |
| ·反应条件 | 第48-49页 |
| ·有机溶剂毒性考察 | 第49页 |
| ·细胞碘化丙啶(PI)染色和流式细胞仪(FCM)检测细胞的存活率 | 第49页 |
| ·水-有机溶剂体系反应 | 第49页 |
| ·产物检测方法 | 第49-50页 |
| ·苯乙二醇及其环碳酸酯检测 | 第49页 |
| ·碳酸二甲酯气相检测检测 | 第49页 |
| ·扁桃酸及其酰化物检测 | 第49-50页 |
| ·旋光测定 | 第50页 |
| ·利用Bacillus sp.ECU0015生长细胞法制备(S)-苯乙二醇 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-57页 |
| ·以Bacillus sp.ECU0015拆分制备(S)-苯乙二醇 | 第50-51页 |
| ·以Bacillus sp.ECU0015细胞制备(R)-扁桃酸及(R)-3-氯扁桃酸 | 第51-52页 |
| ·Bacillus sp.ECU0015转化碳酸二甲酯 | 第52页 |
| ·不同有机溶剂对芽孢杆菌细胞的毒性考察 | 第52-56页 |
| ·流式细胞仪工作原理及细胞PI染色 | 第52-54页 |
| ·细胞PI染色及流式细胞仪检测细胞存活率与不同有机溶剂的关系 | 第54-56页 |
| ·不同有机溶剂对Bacillus sp.ECU0015细胞催化反应的影响 | 第56页 |
| ·利用Bacillus sp.ECU0015生长细胞克级制备(S)-苯乙二醇 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-60页 |
| ·具有高立体选择性转化环碳酸酯的菌株的筛选 | 第58页 |
| ·Bacillus sp.ECU0015产酶及反应特性研究 | 第58页 |
| ·Bacillus sp.ECU0015在手性苯乙二醇、扁桃酸制备中的应用及两相反应探索 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
