| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 1 引言和文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 HPRG2基因及其研究进展 | 第11页 |
| 1.2 TGF-B信号通路、SMADS蛋白家族 | 第11-15页 |
| 1.2.1 TGF-β信号通路 | 第11-13页 |
| 1.2.2 Smads蛋白家族 | 第13-15页 |
| 1.3 TGF-B信号通路与癌症发生机制概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 TGF-β信号通路的调节机制 | 第15页 |
| 1.3.2 TGF-β信号通路对细胞生长的调节作用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 TGF-β信号通路调控癌症的机制 | 第16-17页 |
| 1.4 TGF-B信号通路与肠癌发生的机制概述 | 第17-18页 |
| 1.4.1 TGF-β信号通路的异常性 | 第17-18页 |
| 1.4.2 促进肿瘤发生、发展机制 | 第18页 |
| 1.5 转录工厂机制概述 | 第18-20页 |
| 1.6 本文的研究意义 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-34页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 生物信息学软件 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 细胞 | 第21页 |
| 2.1.4 结直肠癌标本 | 第21-22页 |
| 2.1.5 酶类、抗体和试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.6 其它试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.7 缓冲液和培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.8 主要实验仪器和耗材 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 组织及细胞中总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 RNA逆转录 | 第25页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第26-27页 |
| 2.2.5 PCR产物与载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.7 转化(热休克法) | 第28页 |
| 2.2.8 质粒的小量提取与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 酶切产物的纯化回收 | 第29-30页 |
| 2.2.10 酶切产物与载体的连接 | 第30页 |
| 2.2.11 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第30页 |
| 2.2.12 细胞蛋白的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.13 免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE | 第32页 |
| 2.2.15 Western blot | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-49页 |
| 3.1 HPRG2调控结直肠癌发生的机制探究 | 第34-49页 |
| 3.1.1 利用RT-PCR检测正常细胞系及癌症细胞系中HPRG2及TGF-β信号通路成员表达差异性 | 第34-36页 |
| 3.1.2 在细胞系中过表达HPRG2,利用RT-PCR检测TGF-β信号通路成员表达变化 | 第36-38页 |
| 3.1.3 在未转染HPRG2的细胞系中,分析HPRG2与TGF-β信号通路成员的表达相关性 | 第38-40页 |
| 3.1.4 人类结直肠癌疾病标本中,HPRG2与TGF-β信号通路成员的表达变化 | 第40-47页 |
| 3.1.5 根据在结直肠癌标本中,HPRG2呈现不同表达量进行分组,分析HPRG2与TGF-β信号通路成员的表达变化 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 5 其它工作 | 第51-58页 |
| 5.1 HPRG2与SMAD6蛋白相互作用研究 | 第51-56页 |
| 5.1.1 Smad6亚克隆构建与鉴定 | 第52-53页 |
| 5.1.2 Smad6亚克隆真核表达质粒的构建 | 第53-55页 |
| 5.1.3 HPRG2蛋白与Smad6-4、Smad6-6的CO-IP实验 | 第55-56页 |
| 5.2 本节讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录1 | 第64-65页 |
| 附录2 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
