| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 WRKY转录因子与植物的胁迫 | 第11页 |
| 1.2 WRKY的结构及分类 | 第11-12页 |
| 1.3 WRKY蛋白结合W-BOX的机制 | 第12-13页 |
| 1.4 WRKY参与植物对生物胁迫的调控 | 第13-14页 |
| 1.5 WRKY参与植物对非生物胁迫的调控 | 第14-18页 |
| 1.5.1 WRKY转录因子与干旱和盐害 | 第14-16页 |
| 1.5.2 WRKY转录因子与温度胁迫 | 第16-17页 |
| 1.5.3 WRKY转录因子与矿质元素胁迫 | 第17-18页 |
| 1.5.4 WRKY转录因子与其它非生物胁迫 | 第18页 |
| 1.6 WRKY调控植物的物质代谢和生长发育 | 第18-20页 |
| 1.6.1 WRKY与植物的物质代谢 | 第18-19页 |
| 1.6.2 WRKY与植物形态建成 | 第19页 |
| 1.6.3 WRKY与种子萌发和种子发育 | 第19-20页 |
| 1.6.4 WRKY与植物衰老 | 第20页 |
| 1.7 立题依据 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基种类及配制 | 第22页 |
| 2.1.4.1 拟南芥转化所用培养基 | 第22页 |
| 2.1.4.2 玉米基本培养液 | 第22页 |
| 2.1.4.3 细菌培养基 | 第22页 |
| 2.1.4.4 酵母培养基 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 ZmWRKY50和ZmWRKY44基因序列的获得与克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.2 物种间WRKY进化树的构建 | 第23页 |
| 2.2.3 ZmWRKY44基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第23-27页 |
| 2.2.3.1 玉米自交系材料的不同非生物胁迫处理 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 玉米总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3.3 RNA样品中的DNA去除和RNA的反转录 | 第25页 |
| 2.2.3.4 ZmWRKY44基因的时空表达模式分析 | 第25-27页 |
| 2.2.4 ZmWRKY50和ZmWRKY44蛋白的亚细胞定位 | 第27页 |
| 2.2.4.1 ZmWRKY50和ZmWRKY44瞬时表达表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.4.2 农杆菌注射渗透法转化烟草瞬时表达 | 第27页 |
| 2.2.4.3 共聚焦荧光显微镜检测 | 第27页 |
| 2.2.5 ZmWRKY50和ZmWRKY4的转录激活功能验证 | 第27-28页 |
| 2.2.5.1 pGBKT7-ZmWRKY50和pGBKT7-ZmWRKY44载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.5.2 ZmWRKY50和ZmWRKY44的转录激活功能验证 | 第28页 |
| 2.2.6 ZmWRKY50和ZmWRKY44基因的遗传转化研究 | 第28-32页 |
| 2.2.6.1 pCBP-ZmWRKY50和pCBP-ZmWRKY44过量表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-53页 |
| 3.1 ZMWRKYSO和ZMWRKY44基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3.2 ZMWRKY50和ZMWRKY44的结构及系统进化树分析 | 第33-34页 |
| 3.3 ZMWRKY44基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第34-38页 |
| 3.3.1 不同样品的RNA提取和CDNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.3.2 标准曲线的制作与溶解曲线 | 第35页 |
| 3.3.3 逆境胁迫条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第35-38页 |
| 3.3.3.1 盐胁迫条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第36页 |
| 3.3.3.2 高温胁迫条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第36-37页 |
| 3.3.3.3 20 %的H_2O_2条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第37页 |
| 3.3.3.4 脱落酸(ABA)处理条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第37-38页 |
| 3.3.3.5 PEG6000处理条件下ZmWRKY44基因的表达情况 | 第38页 |
| 3.4 ZMWRKY50和ZMWRKY44蛋白的亚细胞定位 | 第38-40页 |
| 3.4.1 ZmWRKY50和ZmWRKY44瞬时表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.4.2 ZmWRKY50和ZmWRKY44在烟草叶片中的亚细胞定位 | 第39-40页 |
| 3.5 ZMWRKY50和ZMWRKY44的转录激活功能验证 | 第40-42页 |
| 3.5.1 pGBKT7-ZmWRKY50和pGBKT7-ZmWRKY44载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.5.2 ZmWRKY50和ZmWRKY44的转录激活功能验证 | 第41-42页 |
| 3.6 ZMWRKY50和ZMWRKY44基因的遗传学功能研究 | 第42-53页 |
| 3.6.1 pCBP-ZmWRKY50和pCBP-ZmWRKY44过量表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.6.2 pCBP-ZmWRKY50和pCBP-ZmWRKY44过量表达载体对拟南芥的转化 | 第44-45页 |
| 3.6.2.1 pCBP-ZmWRKY50和pCBP-ZmWRKY44过量表达载体转化农杆菌 | 第44页 |
| 3.6.2.2 农杆菌介导的拟南芥花序转化以及转基因植株的分子检测 | 第44-45页 |
| 3.6.3 35S：：ZmWRKY44拟南芥植株的耐盐性分析 | 第45-48页 |
| 3.6.3.1 ZmWRKY44高效表达转基因植株的筛选 | 第45-46页 |
| 3.6.3.2 盐胁迫对35S：：ZmWRKY44种子发芽率的影响 | 第46-47页 |
| 3.6.3.3 盐胁迫对35S：：ZmWRKY44植株生长的影响 | 第47-48页 |
| 3.6.4 35S：：ZmWRKY44拟南芥植株中的耐逆基因表达特性分析 | 第48-53页 |
| 3.6.4.1 标准曲线的制作与溶解曲线 | 第48-50页 |
| 3.6.4.2 35S：：ZmWRKY44拟南芥植株中的耐逆基因表达特性分析 | 第50-53页 |
| 4 结果讨论 | 第53-58页 |
| 4.1 ZMWRKY50和ZMWRKY44的进化关系 | 第53-54页 |
| 4.2 ZMWRKY50和ZMWRKY44的亚细胞定位以及酵母转录激活 | 第54页 |
| 4.3 ZMWRKY44基因对非生物逆境的调控 | 第54-58页 |
| 4.3.1 干旱胁迫对ZmWRKY44基因表达的影响 | 第55页 |
| 4.3.2 高温胁迫对ZmWRKY44基因表达的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 H_2O_2对ZmWRKY44基因表达的影响 | 第56页 |
| 4.3.4 ZmWRKY44对植物盐胁迫的调控 | 第56-58页 |
| 4.3.4.1 盐胁迫对355：：ZmWRKY44植株表型的影响 | 第56页 |
| 4.3.4.2 ZmWRKY44负调控盐胁迫途径的分子机制 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
