| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1 水稻稻瘟病及稻瘟病菌 | 第14-15页 |
| 1.1 水稻稻瘟病 | 第14页 |
| 1.2 稻瘟病菌侵染致病机理 | 第14-15页 |
| 2 Rab蛋白家族 | 第15-18页 |
| 2.1 Rab家族蛋白的结构 | 第16页 |
| 2.2 Rab家族蛋白的功能 | 第16-18页 |
| 2.2.1 Rab蛋白的囊泡运输功能 | 第17页 |
| 2.2.2 Rab蛋白的循环 | 第17-18页 |
| 3 Rab5的研究进展 | 第18-21页 |
| 3.1 Rab5蛋白 | 第18-19页 |
| 3.2 Rab5蛋白的分布 | 第19页 |
| 3.3 Rab5的效应因子 | 第19页 |
| 3.4 Rab5蛋白的功能 | 第19-21页 |
| 4 本研究的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 实验菌株和植物 | 第22页 |
| 1.2 实验质粒 | 第22页 |
| 1.3 主要化学试剂 | 第22页 |
| 1.4 实验常用培养基 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.1 生物信息分析方法 | 第23-24页 |
| 2.2 构建载体 | 第24-28页 |
| 2.2.1 制备高效率感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.2 PCR反应体系 | 第26页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第26页 |
| 2.2.4 TA克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.5 酶切及连接体系 | 第27页 |
| 2.2.6 细菌转化 | 第27-28页 |
| 2.3 稻瘟菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 2.4 质粒提取的方法 | 第28-29页 |
| 2.5 稻瘟病菌基因组总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.6 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第30-31页 |
| 2.7 原生质体转化及转化子的筛选 | 第31页 |
| 2.8 RNA的反转录 | 第31-32页 |
| 2.9 Real-time PCR | 第32页 |
| 2.10 稻瘟病菌表型分析 | 第32-35页 |
| 2.10.1 菌落生长速率测定与菌落颜色观察 | 第32页 |
| 2.10.2 产孢量测定 | 第32-33页 |
| 2.10.3 孢子萌发率和附着胞形成率测定 | 第33页 |
| 2.10.4 洋葱表皮侵染实验 | 第33页 |
| 2.10.5 离体接种大麦 | 第33页 |
| 2.10.6 水稻育苗及接种方法 | 第33页 |
| 2.10.7 水稻发病调查 | 第33-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-63页 |
| 1 稻瘟病菌中MoRab51假定互作蛋白生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 1.1 稻瘟病菌中MoRab51假定互作蛋白的获得 | 第35-37页 |
| 1.2 稻瘟病菌中MoRab51假定互作蛋白的理化性质分析 | 第37-38页 |
| 2 MoRab51假定互作蛋白MoYIP3、MoVPS9与MoRab51的互作关系验证 | 第38-43页 |
| 2.1 稻瘟病菌MoRab51负显性失活诱饵载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.2 pGADT7-MoVPS9和pGADT7-MoYIP3载体的构建及酵母双杂交 | 第41-42页 |
| 2.3 酵母双杂交验证实验 | 第42-43页 |
| 3 MoRab51假定互作蛋白的MoYIP3、MoVPS9的基因功能分析 | 第43-63页 |
| 3.1 MoYIP3(MGG_15244)的功能分析 | 第43-52页 |
| 3.1.1 MoYIP3的生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 3.1.1.1 MoYIP3同源蛋白比对及其系统进化树分析 | 第43-45页 |
| 3.1.2 MoYIP3敲除突变体的获得及生物功能分析 | 第45-52页 |
| 3.1.2.1 MoYIP3同源重组长片段的获得 | 第45页 |
| 3.1.2.2 MoYIP3敲除突变体的筛选及其验证 | 第45-46页 |
| 3.1.2.3 MoYIP3敲除突变体生物功能分析 | 第46-52页 |
| 3.1.2.3.1 MoYIP3敲除突变体菌落形态观察 | 第46-48页 |
| 3.1.2.3.2 MoYIP3敲除突变体产孢量统计 | 第48-49页 |
| 3.1.2.3.3 MoYIP3敲除突变体孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第49-50页 |
| 3.2.2.3.4 MoRab51在MoYIP3敲除突变体中的表达量分析 | 第50页 |
| 3.1.2.3.5 MoYIP3敲除突变体致病性分析 | 第50-52页 |
| 3.2 MoVPS9(MGG_05379)的功能分析 | 第52-63页 |
| 3.2.1 MoVPS9的生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 3.2.1.1 MoVPS9同源蛋白比对及其系统进化树分析 | 第52-53页 |
| 3.2.2 MoVPS9敲除突变体的获得及生物功能分析 | 第53-63页 |
| 3.2.2.2 MoVPS9敲除突变体的筛选及验证 | 第54-55页 |
| 3.2.2.3 Mo VPS9敲除突变体生物功能分析 | 第55-63页 |
| 3.2.2.3.1 MoVPS9敲除突变体菌落形态观察 | 第55-56页 |
| 3.2.2.3.2 MoVPS9敲除突变体产孢量统计 | 第56-57页 |
| 3.2.2.3.3 Mo VPS9敲除突变体分生孢子梗观察 | 第57-58页 |
| 3.2.2.3.4 MoVPS9敲除突变体分生孢子形态观察 | 第58页 |
| 3.2.2.3.5 MoRab51在MoVPS9敲除突变体中的表达量分析 | 第58-59页 |
| 3.2.2.3.6 Mo VPS9敲除突变体细胞壁敏感性分析 | 第59-60页 |
| 3.2.2.3.7 Mo VPS9敲除突变体致病性分析 | 第60-63页 |
| 第四章 讨论与小结 | 第63-66页 |
| 4.1 MoYIP3、MoVPS9与MoRab51的互作关系 | 第63页 |
| 4.2 MoYIP3生物功能的讨论 | 第63页 |
| 4.3 MoVPS9生物功能的讨论 | 第63-64页 |
| 4.4 浅谈MoVPS9的CUE结构域 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
