| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第11-32页 |
| 1.1 水稻锯齿叶矮缩病毒 | 第11-14页 |
| 1.1.1 水稻锯齿叶矮缩病毒的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.2 水稻锯齿叶矮缩病毒的发生及其危害 | 第12页 |
| 1.1.3 水稻锯齿叶矮缩病毒的传播方式 | 第12页 |
| 1.1.4 水稻锯齿叶矮缩病的发病特征 | 第12-13页 |
| 1.1.5 水稻锯齿叶矮缩病的诊断方法 | 第13页 |
| 1.1.6 水稻锯齿叶矮缩病的防治措施 | 第13-14页 |
| 1.2 缺刻蛋白研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 缺刻蛋白研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2 缺刻蛋白的功能 | 第15-20页 |
| 1.2.2.1 缺刻蛋白对植物叶片生长的影响 | 第17页 |
| 1.2.2.2 缺刻蛋白参与microRNA前体的加工 | 第17-20页 |
| 1.2.3 缺刻蛋白对叶片发育的调控机制 | 第20页 |
| 1.3 microRNA的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.3.1 microRNA的研究概况 | 第20-21页 |
| 1.3.2 microRNA的功能 | 第21-22页 |
| 1.3.3 与叶片发育有关的microRNA | 第22-24页 |
| 1.3.4 miRNA与植物的生长发育 | 第24页 |
| 1.4 水稻遗传转化研究进展 | 第24-31页 |
| 1.4.1 水稻遗传转化发展历程 | 第24-25页 |
| 1.4.2 一种快速水稻遗传转化方法的建立 | 第25页 |
| 1.4.3 水稻遗传转化的方法 | 第25-28页 |
| 1.4.4 影响遗传转化的因素 | 第28-30页 |
| 1.4.5 我国水稻遗传转化的研究进展 | 第30页 |
| 1.4.6 水稻遗传转化面临的挑战 | 第30-31页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第31-32页 |
| 第二章 RRSV侵染水稻后缺刻蛋白基因表达量验证 | 第32-39页 |
| 2.1 材料与主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.1 材料 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32页 |
| 2.3 病株的分子检测 | 第32-35页 |
| 2.3.1 植物总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 RNA的反转录 | 第33-34页 |
| 2.3.3 cDNA的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.3.4 结果分析 | 第34-35页 |
| 2.4 Real-time PCR检测 | 第35-39页 |
| 2.4.1 Real-time PCR检测引物的设计 | 第35-36页 |
| 2.4.2 利用试剂盒提取感病水稻叶片总RNA | 第36-37页 |
| 2.4.3 Real-time PCR检测感病水稻缺刻蛋白表达量 | 第37-38页 |
| 2.4.4 结果分析 | 第38-39页 |
| 第三章 水稻缺刻基因的克隆与植物表达载体的构建 | 第39-58页 |
| 3.1 材料与主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.1 材料 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.2 水稻缺刻基因的克隆 | 第39-46页 |
| 3.2.1 水稻缺刻基因的引物设计 | 第39-40页 |
| 3.2.2 水稻总RNA的提取与反转录 | 第40页 |
| 3.2.3 目的DNA片段的扩增 | 第40页 |
| 3.2.4 目的片段的回收 | 第40-41页 |
| 3.2.5 目的DNA片段连接pEASY-T5 Zero Blunt克隆载体 | 第41-42页 |
| 3.2.6 感受态细胞的制备和连接反应对宿主感受态细胞的转化 | 第42页 |
| 3.2.6.1 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 3.2.6.2 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞 | 第42页 |
| 3.2.7 小量质粒的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.8 阳性重组子的PCR和酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.9 结果分析 | 第44-46页 |
| 3.3 植物表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.3.1 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.3.2 结果分析 | 第47-49页 |
| 3.4 RNAi载体的构建 | 第49-55页 |
| 3.4.1 引物的设计 | 第49-50页 |
| 3.4.2 构建RNAi植物表达载体 | 第50-51页 |
| 3.4.2.1 目的片段的获取及其克隆 | 第50页 |
| 3.4.2.2 中间载体PUCC构建 | 第50-51页 |
| 3.4.2.3 植物表达载体PXQ-Act的构建 | 第51页 |
| 3.4.3 结果分析 | 第51-55页 |
| 3.5 植物表达载体转化农杆菌EHA105菌株 | 第55-58页 |
| 3.5.1 农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第55页 |
| 3.5.2 重组质粒转化农杆菌感受态细胞 | 第55-56页 |
| 3.5.3 重组子转化农杆菌后的菌液PCR鉴定 | 第56页 |
| 3.5.4 结果分析 | 第56-58页 |
| 第四章 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第58-72页 |
| 4.1 材料与主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.2.1 水稻成熟胚愈伤的诱导 | 第58-59页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第59-60页 |
| 4.2.3 水稻植株的再生 | 第60页 |
| 4.2.4 结果分析 | 第60-63页 |
| 4.3 转基因水稻的分子检测 | 第63-68页 |
| 4.3.1 转基因水稻的分子检测 | 第63页 |
| 4.3.1.1 CTAB法提取水稻叶片DNA | 第63页 |
| 4.3.1.2 转基因水稻的PCR检测 | 第63页 |
| 4.3.2 RT-PCR检测转基因水稻缺刻蛋白基因的表达量 | 第63-66页 |
| 4.3.3 Western blot检测转基因水稻中缺刻蛋白表达量 | 第66-67页 |
| 4.3.3.1 转基因水稻蛋白的提取 | 第66页 |
| 4.3.3.2 Western blot检测蛋白表达量 | 第66-67页 |
| 4.3.4 结果分析 | 第67-68页 |
| 4.4 转基因水稻的表型症状及其分析 | 第68-72页 |
| 第五章 全文总结与讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 附录一 常用培养基的配制 | 第81-85页 |
| 附录二 转基因培养基的配制 | 第85-89页 |
| 附录三 western bolt试剂的配制 | 第89-91页 |
| 附录四 载体图谱 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
