| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 蜜蜂王浆蛋白研究概述 | 第13-23页 |
| 1 蜂王浆及其生物学功能 | 第13-14页 |
| 1.1 蜂王浆的组分 | 第13页 |
| 1.2 蜂王浆的功能和作用 | 第13-14页 |
| 2 王浆蛋白(MRJPs)家族 | 第14-19页 |
| 2.1 MRJPs的发现和命名 | 第14-15页 |
| 2.2 MRJPs的分子研究概况 | 第15-16页 |
| 2.3 MRJPs的表达与功能研究概况 | 第16-18页 |
| 2.4 MRJPs的分子系统进化分析 | 第18-19页 |
| 3 荧光定量技术 | 第19页 |
| 3.1 荧光定量技术的发展及应用 | 第19页 |
| 3.2 比较CT法 | 第19页 |
| 4 基因干扰技术及其在蜜蜂RNAi中的应用 | 第19-21页 |
| 4.1 试剂盒合成dsRNA介导的RNAi | 第19-20页 |
| 4.2 L4440-HT115工程菌介导的RNAi | 第20-21页 |
| 5 本论文拟解决的问题 | 第21-23页 |
| 第二章 西方蜜蜂体内王浆蛋白MRJP6基因的表达 | 第23-32页 |
| 1 材料和方法 | 第23-25页 |
| 1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 供试蜜蜂 | 第23页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 1.2 试验方法 | 第24-25页 |
| 1.2.1 RNA提取与cDNA合成 | 第24页 |
| 1.2.2 mrjp6克隆与定量引物验证 | 第24页 |
| 1.2.3 荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 1.2.4 数据分析 | 第25页 |
| 2 试验结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.1 mrjp6引物验证 | 第25-26页 |
| 2.1.1 蓝白斑筛选与酶切验证 | 第25-26页 |
| 2.1.2 mrjp6基因片段的序列分析 | 第26页 |
| 2.2 引物特异性检验 | 第26页 |
| 2.3 标准曲线建立 | 第26-27页 |
| 2.4 mrjp6在各期三型蜂中的表达 | 第27-28页 |
| 2.5 mrjp6在哺育蜂和采集蜂不同组织的表达 | 第28-29页 |
| 3 结论与讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 利用试剂盒合成dsRNA干扰西方蜜蜂mrjp8的研究 | 第32-48页 |
| 1 材料和方法 | 第32-36页 |
| 1.1 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 供试蜜蜂 | 第32页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第32-33页 |
| 1.2 试验方法 | 第33-36页 |
| 1.2.1 RNA提取和cDNA合成 | 第33页 |
| 1.2.2 试剂盒合成并纯化dsRNA | 第33-34页 |
| 1.2.2.1 试剂盒合成dsRNA | 第33-34页 |
| 1.2.2.2 纯化mrjp8 dsRNA | 第34页 |
| 1.2.3 试剂盒合成并纯化egfp dsRNA | 第34-35页 |
| 1.2.4 dsRNA干扰试验 | 第35-36页 |
| 1.2.4.1 dsRNA饲喂干扰工蜂 | 第35页 |
| 1.2.4.2 dsRNA注射干扰工蜂 | 第35-36页 |
| 1.2.4.3 dsRNA饲喂干扰蜂王 | 第36页 |
| 1.3 数据分析 | 第36页 |
| 2 试验结果与分析 | 第36-46页 |
| 2.1 mrjp8的PCR扩增、质粒重组及基因克隆 | 第36-37页 |
| 2.2 mrjp8和egfp dsRNA的合成 | 第37-39页 |
| 2.3 dsRNA干扰结果与分析 | 第39-46页 |
| 2.3.1 dsRNA干扰工蜂试验 | 第39-44页 |
| 2.3.1.1 以1μg dsRNA饲喂干扰工蜂 | 第39-40页 |
| 2.3.1.2 以50ng dsRNA持续饲喂干扰工蜂 | 第40-42页 |
| 2.3.1.3 dsRNA注射干扰工蜂 | 第42-44页 |
| 2.3.2 dsRNA饲喂干扰蜂王 | 第44-46页 |
| 3 结论与讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 利用细菌表达dsRNA干扰西方蜜蜂mrjp8的表达研究 | 第48-58页 |
| 1 材料和方法 | 第48-51页 |
| 1.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 供试蜜蜂 | 第48页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 1.2 试验方法 | 第49-51页 |
| 1.2.1 mrjp8 dsRNA表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 1.2.2 mrjp8 dsRNA诱导表达及纯化 | 第50页 |
| 1.2.3 对照基因egfp dsRNA表达载体构建与诱导纯化 | 第50页 |
| 1.2.4 IPTG诱导合成dsRNA的工程菌饲喂干扰工蜂试验 | 第50-51页 |
| 1.3 数据分析 | 第51页 |
| 2 试验结果与分析 | 第51-56页 |
| 2.1 mrjp8 dsRNA细菌表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.2 mrjp8 dsRNA的诱导表达及纯化 | 第52-53页 |
| 2.3 egfp dsRNA表达体系的构建与诱导表达纯化 | 第53页 |
| 2.4 工程菌饲喂干扰工蜂结果分析 | 第53-56页 |
| 2.4.1 不同浓度工程菌饲喂干扰工蜂死亡率统计 | 第53-54页 |
| 2.4.2 运用qRT-PCR分析不同浓度工程菌饲喂干扰结果 | 第54-55页 |
| 2.4.3 运用光密度定量分析高浓度连续饲喂干扰结果 | 第55-56页 |
| 3 结论与讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 总结与研究展望 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
