| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-20页 |
| 1.1 棒状体蛋白的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.2 弓形虫的棒状体蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3 疟原虫的棒状体蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4 艾美耳球虫的棒状体蛋白 | 第19页 |
| 1.5 总结 | 第19-20页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫EtCBS和EtCHP317基因的克隆及生物信息学分析 | 第20-39页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.2.2 实验虫株 | 第21页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第21页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.5 试剂配制方法 | 第21-22页 |
| 2.2.6 不同发育阶段柔嫩艾美耳球虫虫体的收集与纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.7 柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.8 柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊RACE模板的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.9 cDNA 5’末端序列的扩增 | 第25-28页 |
| 2.2.10 基因23和 317的生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2.11 柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.2.12 扩增目的基因的开放阅读框 | 第28-29页 |
| 2.2.13 两个基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段转录水平分析 | 第29-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-37页 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体的收集与纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 目的基因23和 317的克隆 | 第33-34页 |
| 2.3.4 基因23和 317的生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 2.3.5 基因EtCBS和EtCHP317在柔嫩艾美耳球虫不同阶段的转录水平分析 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫EtCBS和EtCHP317基因的原核表达及其功能初步研究 | 第39-57页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 材料与方法 | 第39-45页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第39页 |
| 3.2.2 实验虫株、载体和实验细胞 | 第39页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第39页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.5 实验试剂 | 第40页 |
| 3.2.6 重组表达质粒pET28a-EtCBS和pET28a-EtCHP317的构建与鉴定 | 第40-42页 |
| 3.2.7 重组蛋白的表达及纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.8 rEtCBS和rEt CHP317重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 3.2.9 抗rEtCBS和rEt CHP317重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 3.2.10多克隆抗体血清IgG的纯化 | 第43页 |
| 3.2.11 rEtCBS和rEtCHP317重组蛋白免疫原性和反应原性分析 | 第43-44页 |
| 3.2.12 DF-1 细胞的复苏与培养 | 第44页 |
| 3.2.13 分析EtCBS和EtCHP317在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的分布 | 第44-45页 |
| 3.2.14 抗rEtCBS和rEtCHP317重组蛋白的多抗对子孢子入侵细胞能力的分析 | 第45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-54页 |
| 3.3.1 原核重组表达质粒的构建 | 第45-47页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3.3.4 重组蛋白多抗的纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.5 rEtCBS和rEt CHP317重组蛋白免疫原性和反应原性分析 | 第50-51页 |
| 3.3.6 EtCBS和EtCHP317在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的分布 | 第51-53页 |
| 3.3.7 体外抑制实验 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫EtCBS和EtCHP317与EtAMA1蛋白互作关系的验证 | 第57-71页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.2.1 实验载体和细胞 | 第57页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第57页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第57-58页 |
| 4.2.4 EtCBS、EtCHP317真核重组质粒的构建 | 第58-59页 |
| 4.2.5 重组真核表达质粒的转染 | 第59页 |
| 4.2.6 间接免疫荧光（IFA）鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达 | 第59页 |
| 4.2.7 Western blot鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第59页 |
| 4.2.8 免疫共沉淀（Co-IP） | 第59-60页 |
| 4.2.9 双分子荧光互补（BiFC）技术 | 第60页 |
| 4.2.10 GST Pull-Down | 第60-61页 |
| 4.3 结果 | 第61-69页 |
| 4.3.1 真核表达重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| 4.3.2 间接免疫荧光（IFA）鉴定真核重组表达质粒在DF-1 细胞中的表达 | 第62-64页 |
| 4.3.3 Western blot分析真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第64-66页 |
| 4.3.4 BiFC检测蛋白间的相互作用 | 第66-67页 |
| 4.3.5 GST Pull-Down | 第67-68页 |
| 4.3.6 免疫共沉淀结果 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫rEtCBS和rEt CHP317重组蛋白的免疫保护实验 | 第71-77页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 材料与方法 | 第71-73页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第71页 |
| 5.2.2 实验虫株 | 第71页 |
| 5.2.3 实验试剂 | 第71页 |
| 5.2.4 rEtCBS、rEtCHP317重组蛋白的大量纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.5 免疫保护程序 | 第72页 |
| 5.2.6 免疫效果评价指标 | 第72-73页 |
| 5.3 结果 | 第73-75页 |
| 5.3.1 增重 | 第73页 |
| 5.3.2 卵囊产量 | 第73-74页 |
| 5.3.3 盲肠病变计分 | 第74页 |
| 5.3.4 细胞因子水平检测 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 全文总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
