| 论文创新点 | 第11-12页 |
| 中文摘要 | 第12-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 研究意义 | 第21-22页 |
| 技术路线 | 第22-24页 |
| 第一部分 文献综述 | 第24-50页 |
| 第一章 狂犬病病毒P蛋白的研究现状 | 第24-38页 |
| 1. 狂犬病病毒 | 第24-27页 |
| 1.1 狂犬病病毒粒子的结构 | 第24-25页 |
| 1.2 狂犬病病毒的基因组结构 | 第25-26页 |
| 1.3 狂犬病病毒的生活周期 | 第26-27页 |
| 2. 狂犬病病毒P蛋白的多功能性 | 第27-36页 |
| 2.1 P蛋白区域的模块化组成 | 第29页 |
| 2.2 P蛋白的磷酸化 | 第29页 |
| 2.3 P蛋白作为病毒聚合酶蛋白L的辅助因子 | 第29-33页 |
| 2.4 P蛋白作为新生N蛋白的伴侣蛋白 | 第33-34页 |
| 2.5 P蛋白的自我聚合 | 第34-35页 |
| 2.6 P蛋白与细胞骨架的互作 | 第35页 |
| 2.7 P蛋白拮抗宿主细胞干扰素反应的能力 | 第35-36页 |
| 2.8 狂犬病病毒P蛋白的截短体 | 第36页 |
| 3. 展望 | 第36-38页 |
| 第二章 Hsp90蛋白的研究现状 | 第38-46页 |
| 1. Hsp90蛋白的简介 | 第38-39页 |
| 2. Hsp90蛋白的结构 | 第39页 |
| 3. Hsp90蛋白的构象动力学 | 第39-40页 |
| 4. Hsp90蛋白辅伴侣分子的调控机制 | 第40页 |
| 5. Hsp90客户蛋白的伴侣循环 | 第40-41页 |
| 6. 翻译后修饰对Hsp90蛋白结构功能的调控 | 第41-43页 |
| 6.1 磷酸化 | 第41-42页 |
| 6.2 乙酰化 | 第42页 |
| 6.3 亚硝基化 | 第42-43页 |
| 7. Hsp90对客户蛋白的识别 | 第43-44页 |
| 8. Hsp90蛋白和客户蛋白的降解 | 第44页 |
| 9. Hsp90抑制剂和人类疾病 | 第44-46页 |
| 第三章 Cdc37蛋白依赖和非依赖Hsp90结合方式稳定客户蛋白的研究进展 | 第46-50页 |
| 1. Cdc37蛋白的简介 | 第46页 |
| 2. 作为Hsp90辅助伴侣蛋白的CdC37 | 第46-47页 |
| 3. 非依赖Hsp90结合活性的Cdc37 | 第47-48页 |
| 4. Cdc37与客户蛋白的互作 | 第48页 |
| 5. Cdc37的结构区域 | 第48页 |
| 6. 存在的问题 | 第48-50页 |
| 第二部分 研究内容 | 第50-110页 |
| 第一章 狂犬病病毒属成员病毒P蛋白作为Hsp90新的客户蛋白的研究 | 第50-72页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第53页 |
| 1.2 细胞培养和病毒感染 | 第53页 |
| 1.3 抗体和药物 | 第53-54页 |
| 1.4 质粒构建和质粒转染 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-57页 |
| 2.1 细胞的药物处理 | 第54页 |
| 2.2 间接免疫荧光实验(IFA) | 第54页 |
| 2.3 病毒滴度TCID_(50)的测定 | 第54-55页 |
| 2.4 免疫印迹 | 第55页 |
| 2.5 免疫共沉淀 | 第55-56页 |
| 2.6 实时荧光定量RT-PCR | 第56页 |
| 2.7 共聚焦分析法 | 第56页 |
| 2.8 细胞活力的测定 | 第56-57页 |
| 2.9 生物学统计分析 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-69页 |
| 3.1 Hsp90抑制剂对狂犬病病毒感染的抑制作用 | 第57-61页 |
| 3.2 Hsp90的抑制未能直接影响狂犬病病毒的转录 | 第61页 |
| 3.3 Hsp90的抑制能够降低RABV病毒蛋白的稳定性 | 第61-65页 |
| 3.4 Hsp90抑制剂对外源性表达P蛋白的特异性降解 | 第65页 |
| 3.5 Hsp90与狂犬病病毒P蛋白的互作 | 第65-68页 |
| 3.6 Hsp90与狂犬病病毒属成员病毒P蛋白的互作 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 第二章 Cdc37参与Hsp90-P复合体形成的分析及其募集P蛋白至Hsp90伴侣系统的机制研究 | 第72-94页 |
| 1 材料 | 第76页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第76页 |
| 1.2 细胞培养和病毒感染 | 第76页 |
| 1.3 抗体和药物 | 第76页 |
| 1.4 质粒构建和质粒转染 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-77页 |
| 2.1 细胞的药物处理 | 第76-77页 |
| 2.2 免疫印迹 | 第77页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第77页 |
| 2.4 共聚焦分析法 | 第77页 |
| 2.5 生物学统计分析 | 第77页 |
| 3 结果 | 第77-91页 |
| 3.1 Cdc37参与Hsp90-P复合物的形成 | 第77-79页 |
| 3.2 Hsp90/Cdc37与狂犬病病毒属成员病毒P蛋白的互作 | 第79-80页 |
| 3.3 Cdc37在募集P蛋白至Hsp90系统过程中呈现依赖Hsp90结合的活性 | 第80-83页 |
| 3.4 Cdc37在募集P蛋白至Hsp90系统过程中存在非依赖Hsp90结合的活性 | 第83-87页 |
| 3.5 Ser13位点非磷酸化Cdc37募集P蛋白至Hsp90系统过程中存在依赖和非依赖Hsp90结合的活性 | 第87-91页 |
| 4 讨论 | 第91-94页 |
| 第三章 Cdc37和Hsp90通过维持P蛋白的稳定性调控狂犬病病毒感染的研究 | 第94-110页 |
| 1 材料 | 第96页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第96页 |
| 1.2 细胞培养和病毒感染 | 第96页 |
| 1.3 抗体和药物 | 第96页 |
| 1.4 质粒构建和质粒转染 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-98页 |
| 2.1 细胞的药物处理 | 第97页 |
| 2.2 免疫印迹 | 第97页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第97页 |
| 2.4 shRNA干扰质粒及其转染 | 第97页 |
| 2.5 间接免疫荧光实验(IFA) | 第97页 |
| 2.6 病毒滴度TCID_(50)的测定 | 第97页 |
| 2.7 荧光实时定量RT-PCR | 第97页 |
| 2.8 生物学统计分析 | 第97-98页 |
| 3 结果 | 第98-108页 |
| 3.1 狂犬病病毒感染诱导Hsp90和Cdc37蛋白的表达 | 第98页 |
| 3.2 Hsp90和Cdc37在蛋白水平上影响P蛋白的累积 | 第98-101页 |
| 3.3 Hsp90和Cdc37在蛋白稳定性上影响P蛋白的累积 | 第101-104页 |
| 3.4 Cdc37或Hsp90敲降后对狂犬病病毒感染的影响 | 第104-106页 |
| 3.5 Cdc37和Hsp90稳定P蛋白促进狂犬病病毒感染的机制模型 | 第106-108页 |
| 4 讨论 | 第108-110页 |
| 全文总结 | 第110-113页 |
| 展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-131页 |
| 附录 | 第131-140页 |
| 附录A 本文涉及的引物和真核表达载体 | 第131-133页 |
| 附录B 英文缩略词表 | 第133-135页 |
| 附录C 常用缓冲液及其配方 | 第135-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 作者简介及攻博期间所取得的科研成果 | 第142页 |
