| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1 马铃薯Y病毒病概况及防治对策 | 第9-12页 |
| 1.1 马铃薯Y病毒概况 | 第9-10页 |
| 1.2 烟草马铃薯Y病毒基因结构 | 第10-11页 |
| 1.3 PVY防治 | 第11-12页 |
| 2 基因沉默 | 第12-15页 |
| 2.1 RNA沉默的发现 | 第12-14页 |
| 2.2 病毒诱导基因沉默 | 第14-15页 |
| 3 VIGS在烟草上的应用 | 第15-17页 |
| 3.1 在烟草基因组学上的应用 | 第15页 |
| 3.2 VIGS在抗病毒病和育种上的应用 | 第15-16页 |
| 3.3 VIGS条件优化 | 第16页 |
| 3.4 TRV载体 | 第16-17页 |
| 4 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 含重组表达载体农杆菌的构建 | 第19-30页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 病毒及载体 | 第19页 |
| 1.2 试剂 | 第19页 |
| 1.3 培养基 | 第19页 |
| 1.4 引物序列 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-26页 |
| 2.1 植物表达载体构建 | 第20-21页 |
| 2.2 植物总RNA提取 | 第21页 |
| 2.3 第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.4 目的PCR扩增 | 第22页 |
| 2.5 PCR产物的纯化回收 | 第22-23页 |
| 2.6 PCR产物向大肠杆菌中链接转化 | 第23-24页 |
| 2.7 质粒提取 | 第24页 |
| 2.8 DNA酶切 | 第24-25页 |
| 2.9 DNA片段的连接 | 第25页 |
| 2.10 农杆菌感受态细胞制备 | 第25页 |
| 2.11 植物表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.12 重组植物表达载体转化农杆菌中 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 3.1 PVY总RNA提取 | 第26-27页 |
| 3.2 PVY功能基因片段获得 | 第27页 |
| 3.3 PVY各片段的克隆 | 第27-28页 |
| 3.4 CP和HC-pro功能基因片段表达载体构建 | 第28页 |
| 3.5 重组表达载体转入农杆菌 | 第28-29页 |
| 4 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导的基因沉默 | 第30-39页 |
| 1. 实验材料 | 第30页 |
| 1.1 供试植物、毒源 | 第30页 |
| 1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-32页 |
| 2.1 农杆菌介导转化烟草 | 第30页 |
| 2.2 分子生物学鉴定转化烟草 | 第30页 |
| 2.3 马铃薯Y病毒接种 | 第30-31页 |
| 2.4 接种病毒试验验证抗性 | 第31页 |
| 2.5 田间试验验证抗性 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 农杆菌侵染烟草植株农杆菌检测 | 第32-35页 |
| 3.2 农杆菌侵染烟草植株PVY检测 | 第35页 |
| 3.3 实验室条件下对被试烟草抗病能力验证 | 第35-36页 |
| 3.4 田间试验验证抗性 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-39页 |
| 第四章 结语 | 第39-42页 |
| 1 结论 | 第39页 |
| 2 讨论 | 第39-42页 |
| 附录A 论文中重要缩写词及中文对照 | 第42-43页 |
| 附录B CP、HC-pro序列对比 | 第43-45页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |