| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 板栗疫病菌与低毒病毒 | 第10-14页 |
| 1.1.1 板栗疫病与板栗疫病菌的发现 | 第10页 |
| 1.1.2 板栗疫病菌慨况 | 第10-11页 |
| 1.1.3 低毒力现象与低毒病毒的发现 | 第11页 |
| 1.1.4 低毒病毒的分子生物学 | 第11-12页 |
| 1.1.5 低毒病毒和板栗疫病菌系统 | 第12-13页 |
| 1.1.6 板栗疫病菌线粒体低毒力现象 | 第13-14页 |
| 1.2 蛋白质组学研究方法 | 第14-20页 |
| 1.2.1 蛋白质组学技术概况 | 第14-15页 |
| 1.2.2 二维凝胶电泳技术 | 第15-16页 |
| 1.2.3 双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术 | 第16-19页 |
| 1.2.4 生物质谱技术 | 第19-20页 |
| 1.3 本研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 板栗疫病菌菌种和培养方法 | 第21页 |
| 2.1.1 板栗疫病菌菌种 | 第21页 |
| 2.1.2 板栗疫病菌菌种短期保存 | 第21页 |
| 2.1.3 板栗疫病菌菌体培养条件与收集 | 第21页 |
| 2.2 板栗疫病菌线粒体的制备 | 第21-23页 |
| 2.2.1 线粒体的粗提 | 第22页 |
| 2.2.2 粗制线粒体的纯化 | 第22页 |
| 2.2.3 纯化线粒体的透射电子显微镜观察 | 第22-23页 |
| 2.3 板栗疫病菌线粒体蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.1 线粒体蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.3.2 线粒体蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| 2.4 板栗疫病菌线粒体蛋白质定量 | 第24-26页 |
| 2.4.1 Bradford溶液的配制 | 第24页 |
| 2.4.2 标准曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.4.3 使用Bradford法定量未知样品 | 第24-26页 |
| 2.5 双向电泳(双向电泳所用试剂配方参见附录) | 第26-29页 |
| 2.5.1 双向电泳第一向等电聚焦 | 第26页 |
| 2.5.2 双向电泳第二向垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-28页 |
| 2.5.3 硝酸银染色 | 第28页 |
| 2.5.4 胶体考马斯亮蓝染色 | 第28页 |
| 2.5.5 图像扫描 | 第28-29页 |
| 2.5.6 软件分析 | 第29页 |
| 2.6 荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE) | 第29-31页 |
| 2.6.1 样品的制备与纯化 | 第29页 |
| 2.6.2 蛋白质样品的pH调节 | 第29页 |
| 2.6.3 蛋白质样品的定量 | 第29页 |
| 2.6.4 蛋白质样品的标记 | 第29-30页 |
| 2.6.5 配制用于标记的CyDye DIGE Flour储存液 | 第30页 |
| 2.6.6 配制CyDye DIGE Flour工作液 | 第30页 |
| 2.6.7 使用CyDye DIGE Flour工作液对样品进行标记 | 第30-31页 |
| 2.6.8 避光条件下进行双向电泳 | 第31页 |
| 2.6.9 激光扫描 | 第31页 |
| 2.6.10 凝胶图像差异分析 | 第31页 |
| 2.7 蛋白质点的质谱鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7.1 银染蛋白质点的酶解处理 | 第32页 |
| 2.7.2 样品的质谱鉴别 | 第32页 |
| 2.8 线粒体蛋白的western blot检验 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-50页 |
| 3.1 板栗疫病菌线粒体提取方法的建立以及双向电泳条件的优化 | 第33-38页 |
| 3.1.1 板栗疫病菌线粒体提取方法的建立 | 第33页 |
| 3.1.2 板栗疫病菌线粒体蛋白双向电泳条件优化 | 第33-36页 |
| 3.1.3 质谱鉴定验证线粒体纯度 | 第36-38页 |
| 3.2 板栗疫病菌线粒体差异蛋白质组学研究 | 第38-50页 |
| 3.2.1 传双向电泳初步检测差异 | 第38-41页 |
| 3.2.2 板栗疫病菌线粒体蛋白的荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE) | 第41页 |
| 3.2.3 差异表达蛋白点的软件分析 | 第41-46页 |
| 3.2.4 差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第46-50页 |
| 4 讨论与结论 | 第50-61页 |
| 4.1 板栗疫病菌线粒体提取条件的优化 | 第50-51页 |
| 4.2 差异表达蛋白质的功能分类 | 第51-52页 |
| 4.3 P5CDH显著下调可导致细胞处于异常的凋亡状态 | 第52-55页 |
| 4.4 低毒病毒侵染对氨基酸代谢途径的调控 | 第55-57页 |
| 4.5 低毒病毒侵染对真菌能量代谢途径的调控 | 第57-58页 |
| 4.6 低毒病毒侵染对板栗疫病菌产生综合影响 | 第58-59页 |
| 4.7 低毒病毒感染与板栗疫病菌线粒体机能障碍 | 第59页 |
| 4.8 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
